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目的與原理轉(zhuǎn)化是指以質(zhì)粒dna或以它為載體構(gòu)建的重組子導(dǎo)入細(xì)菌的過(guò)程。轉(zhuǎn)化技術(shù)在基因工程領(lǐng)域中占有極重要的地位。目前用得較多的轉(zhuǎn)化技術(shù)為將人工構(gòu)建的重組質(zhì)粒到如受體細(xì)胞，使重組質(zhì)粒在受體細(xì)胞中穩(wěn)定地復(fù)...
體外通過(guò)基因工程手段所構(gòu)建的含目的基因的重組質(zhì)粒,選用轉(zhuǎn)化和篩選技術(shù),可獲得含重組的陽(yáng)性克隆.在此陽(yáng)性克隆中,DNA可在生物體系中大量擴(kuò)增,繁殖,保存以及表達(dá)目的基因的產(chǎn)物,這是PCR體外擴(kuò)增DNA所...
外源DNA片段和線狀質(zhì)粒載體的連接，也就是在雙鏈DNA5'磷酸和相鄰的3'羥基之間形成的新的共價(jià)鏈。如質(zhì)粒載體的兩條鏈都帶5'磷酸，可生成4個(gè)新的磷酸二酯鏈。但如果質(zhì)粒DNA已去磷酸化，則吸能形成2個(gè)...
在自然條件下,很多質(zhì)粒都可通過(guò)細(xì)菌接合作用轉(zhuǎn)移到新的宿主內(nèi),但在人工構(gòu)建的質(zhì)粒載體中,一般缺乏此種轉(zhuǎn)移所必需的mob基因,因此不能自行完成從一個(gè)細(xì)胞到另一個(gè)細(xì)胞的接合轉(zhuǎn)移。如需將質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)移進(jìn)受體細(xì)菌...
一、原理回收目的片段的方法很多，常用的有凍融法，低熔點(diǎn)瓊脂糖法，透析代法、電泳回收法、玻璃孔回收法等。本實(shí)驗(yàn)采用電泳回收法。通過(guò)特別的V形電泳槽，將挖出的含有目的片段的凝膠置于V形槽前，接通電泳電源，...
1998年，AndrewFire和CraigMello提出了一項(xiàng)新技術(shù)：通過(guò)dsRNA誘導(dǎo)特異基因的沉默，即所謂RNAi。2000年，AmyPasquinelli等將lin-4和let-7作小時(shí)序RN...
由于在一些生物中RNAi的影響格外顯著，有人提出在RNAi途徑中可能存在某個(gè)(信號(hào))擴(kuò)增的步驟。這種擴(kuò)增可能是復(fù)制外源注入的dsRNA從而產(chǎn)生更多的sirna，也可能是直接擴(kuò)增siRNA本身。這種擴(kuò)增...
1868年，瑞士的內(nèi)科醫(yī)生FriedrichMiescher從外科醫(yī)院包扎傷口的繃帶上的膿細(xì)胞核中提取到一種富含磷元素的酸性化合物，將其稱(chēng)為核質(zhì)(nuclein);后來(lái)他又從鯖魚(yú)精中分離出類(lèi)似的物質(zhì)，...
1.外源基因在原核細(xì)胞中的表達(dá)蛋白質(zhì)通常是研究的zui終目標(biāo)，因此蛋白質(zhì)的表達(dá)在基因工程中占有非常重要的地位。常用的表達(dá)系統(tǒng)有原核細(xì)胞和真核細(xì)胞。原核細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)主要使用大腸桿菌，真核細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)主要...
隨著分子生物學(xué)研究發(fā)展的不斷廣泛和深入，PCR已成為一門(mén)相當(dāng)成熟的常規(guī)技術(shù)，而熱聚合酶（即Taq酶）的合理選擇是PCR成敗與否的一個(gè)關(guān)鍵因素。目前市面上有多種Taq酶，能夠滿足多方面的實(shí)驗(yàn)需要。那么，...
ThisprotocolyieldsplasmidDNAthatissuitableforrestrictiondigestsａndcloningpurposes.Thispreparationmet...
堿裂解法提取質(zhì)粒利用的是共價(jià)閉合環(huán)狀質(zhì)粒DNA與線狀的染色體DNA片段在拓?fù)鋵W(xué)上的差異來(lái)分離它們。在pH值介于12.0-12.5這個(gè)狹窄的范圍內(nèi)，線狀的DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)變性，在這樣的條件下，共價(jià)閉...
隨著對(duì)基因認(rèn)識(shí)的不斷深入，發(fā)現(xiàn)在同種生物的不同個(gè)體之間，盡管其蛋白質(zhì)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)和功能*相同或僅存在著細(xì)微的差異，但在DNA水平卻存在著差異，尤其在不編碼蛋白質(zhì)的區(qū)域以及沒(méi)有重要調(diào)節(jié)功能的區(qū)域表現(xiàn)更為突...
一．外源RNA誘導(dǎo)RNAi的應(yīng)用1.基因功能研究從2001年《Nature》雜志上報(bào)道在哺乳動(dòng)物培養(yǎng)細(xì)胞中通過(guò)siRNA成功誘導(dǎo)了特異性靶基因表達(dá)沉默后，RNA干擾技術(shù)就作為一項(xiàng)特異性基因沉默的有效工...
定量pcr實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)明操作2xtaqManUniversalPCRMasterMix20xTaqManGeneexpressionKits1.模板、引物及探針用量DNA用量：10~100ng每反應(yīng)；cDN...
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