【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱  人套細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞；JeKo-1使用說明書
形態(tài)特性   淋巴母細(xì)胞
生長特性  懸浮生長
特征特性   一位套細(xì)胞淋巴瘤患者的巨細(xì)胞變種顯示白血病轉(zhuǎn)變，從其外周血單核細(xì)胞出發(fā)建立了MCL細(xì)胞株JeKo-1。 JeKo-1細(xì)胞EB病毒陰性，并表達(dá)一種B細(xì)胞表型的IgM。 細(xì)胞過表達(dá)cyclin D1, Bcl-2, c-Myc 及 Rb 蛋白。 Bcl-1/J(H)基因重排得到了PCR證實。 JeKo-１細(xì)胞在SCID小鼠中高成瘤。 [PubMed: 9753063] 
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，20%
傳代方法   1:2。3天內(nèi)可長滿。
傳代情況  PN5
凍存條件   *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測  陰性
STR   Amelogenin:X；CSF1PO:9,12；D13S317:8,9；D16S539:12；D18S51:13,15；D19S433:13；D21S11:30,33.2；D2S1338:17,25；D3S1358:15,16；D5S818:10,13；D7S820:10,11；D8S1179:11,14；FGA:21,24；TH01:7；TPOX:8；vWA:14
同工酶  
染色體  
使用權(quán)限  A類

復(fù)蘇操作要點： 
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。 
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。 
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。 
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
七葉苷培養(yǎng)基    10(g)                
半固體動力培養(yǎng)基    250(g)                
牛津瓊脂（OXA）基礎(chǔ)    250(g)                
PALCAM培養(yǎng)基基礎(chǔ)    250(g)                
Fraser肉湯基礎(chǔ)    250(g)                
FB1/Half Fraser配套試劑(吖啶黃素、萘啶酮酸、檸檬酸鐵銨、氯化鋰)    4支/套×5(g)                
Fraser配套試劑(吖啶黃素、萘啶酮酸、檸檬酸鐵銨、氯化鋰)    4支/套×5(g)                
FB2配套試劑(吖啶黃素、萘啶酮酸、氯化鋰)    3支/套×5(g)                
Fraser/Half Frase/FB1添加劑（A和B）    5mL×2/套×5(g)                
FB2添加劑    5mL/支×10(g)                
Fraser肉湯/FB2基礎(chǔ)    250(g)                
Half Fraser肉湯/FB1基礎(chǔ)    250(g)                
BLEB基礎(chǔ)    250(g)                
UVM培養(yǎng)基    100(g)                
LPM瓊脂基礎(chǔ)    100(g)                hospho-ATF2 (Thr71 + Thr53)    磷酸化活化復(fù)制因子2抗體
phospho-ATF2(Thr71)    磷酸化活化復(fù)制因子2抗體
ATF5    活化轉(zhuǎn)錄因子5抗體
ATF6 beta    活化轉(zhuǎn)錄因子6β抗體
ATIC    AICAR甲?；D(zhuǎn)移酶抗體
phospho-ATM (Ser794)    磷酸化毛細(xì)血管擴(kuò)張共濟(jì)失調(diào)癥突變蛋白抗體
ATP5E    ATP5E蛋白抗體
ATP5G2    ATP5G2蛋白抗體
ADAR1 (C-terminus)    雙鏈RNA腺苷酸脫氨基酶抗體（C端）
AF10    髓系、淋巴、混合系白血病易位基因10抗體
ADCY1    腺苷酸環(huán)化酶1抗體
APC    腺瘤樣息肉抗體
AGPAT1    溶血磷脂?；D(zhuǎn)移酶抗體
ANKS3    錨蛋白重復(fù)及SAM結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體
phospho-ALK (Tyr1586)    磷酸化間變型淋巴瘤激酶抗體
ACADVL    ?；?脫氫酶很長鏈抗體