【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細胞名稱  人肝癌細胞；HepG2使用說明書
形態(tài)特性   上皮樣細胞
生長特性  貼壁生長
特征特性   該細胞系來源于一15歲男性白人的肝細胞癌組織。模式染色體數(shù)為55條，有一條重排的1號染色體。此細胞對裸鼠沒有致瘤性。未檢測到HBV的基因組。 
培養(yǎng)條件    10%FBS
傳代方法   1:3傳代；3-4天一次
傳代情況  PN3
凍存條件   基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  熒光法（-）
STR   Amelogenin：XY；CSF1PO:10,11；D13S317:9,13；D16S539:,13；D18S51:13,14；D19S433:15.2；D21S11:29,31；D2S1338:19,20；D3S1358:15,16；D5S818:11,12；D7S820:10；D8S1179:15,16；FGA:22,25；TH01:9；THOX:8,9；vWA:17；
同工酶  無
染色體   50-64
使用權限  A類

復蘇操作要點： 
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。 
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。 
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。 
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。 
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。 
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
CM-H093    人顱蓋造骨細胞*培養(yǎng)基    100mL
CM-H094    人滑膜細胞*培養(yǎng)基    100mL
CM-H095    人骨骼肌細胞*培養(yǎng)基    100mL
CM-H096    人關節(jié)軟骨細胞*培養(yǎng)基    100mL
CM-H112    人脂肪細胞*培養(yǎng)基    100mL
CM-H113    人表皮角質形成細胞*培養(yǎng)基    100mL
CM-H114    人前脂肪細胞*培養(yǎng)基    100mL
CM-H115    人腦動脈血管內皮細胞*培養(yǎng)基    100mL
CM-H116    人腦動脈血管平滑肌細胞*培養(yǎng)基    100mL
CM-H117    人腦靜脈血管內皮細胞*培養(yǎng)基    100mL
CM-H118    人腦靜脈血管平滑肌細胞*培養(yǎng)基    100mL
CM-H119    人腦膜細胞*培養(yǎng)基    100mL
CM-H120    人神經元細胞*培養(yǎng)基    100mL
CM-H121    人神經少突起前質膠質細胞*培養(yǎng)基    100mL
CM-H122    人神經星形膠質細胞*培養(yǎng)基    100mL
CM-H123    人神經小膠質細胞*培養(yǎng)基    100mLCNTF    睫狀神經營養(yǎng)因子抗體
CK16    細胞角蛋白16抗體
C4orf17     4號染色體開放閱讀框17抗體
CYFIP2    細胞質脆X智力低下蛋白結合蛋白2抗體
CRLF2    胸腺基質淋巴細胞生成素受體抗體
CK12    細胞角蛋白12抗體
Ceramide glucosyltransferase     *半*γ合成酶抗體
CD5    CD5抗體
ICAM1    細胞間粘附分子-1抗體
CD56    神經細胞粘附分子1抗體
CD62L    L選擇素抗體
CD68    CD68抗體