EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞；KMY0928特性來源可靠（源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等），活力>95%，貼壁性好。我們從試劑、包被器皿、凍存原代細(xì)胞、新鮮原代細(xì)胞、原代細(xì)胞的分子學(xué)實(shí)驗(yàn)等提供全程服務(wù)。我司擁有專業(yè)的實(shí)驗(yàn)室，可無菌操作并提供相關(guān)科研項(xiàng)目解決方案以及實(shí)驗(yàn)服務(wù)。
| 產(chǎn)品名稱 | 生長特性 | 發(fā)貨地 | 貨期 |
| EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞；KMY0928特性 | 懸浮生長 | 上海 | 3－5天 |
細(xì)胞名稱
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
生長特性 懸浮生長
特征特性 該細(xì)胞系來源于一成年男性的外周血。2009年由中科院昆明細(xì)胞庫通過EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 15%NBS
傳代方法 1:2傳代；5-6天一次
傳代情況 P2
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 熒光法（-）
STR -
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量*，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細(xì)胞，加入適量*，使*的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去*，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止*作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。
Tn- I (Mouse Troponin I ) ELISA Kit 小鼠肌鈣蛋白Ⅰ Multi-class antibodies 規(guī)格： 48T
SAA(Mouse Serum amyloid A)ELISA Kit 小鼠血清淀粉樣蛋白A Multi-class antibodies 規(guī)格： 48T
ACA(Mouse anti-centrol and centrosome antibody)ELISA Kit 小鼠抗中粒/中心體抗體 Multi-class antibodies 規(guī)格： 48T
Hpt/HP(Mouse Haptoglobin)ELISA Kit 小鼠結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白 Multi-class antibodies 規(guī)格： 48T
16- Alpha OHE-1(Mouse 16- AlphaHydroxyestrogen 1)ELISA Kit Hpt/HP小鼠16α羥基雌酮1 Multi-class antibodies 規(guī)格： 48T
Alpha1-AGP(Mouse Alpha1-Acid glycoprotein)ELISA Kit 小鼠α1酸糖蛋白 Multi-class antibodies 規(guī)格： 48T
eNOS-3(Mouse Endothelial nitric oxide synthase 3)ELISA Kit 小鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成酶3 Multi-class antibodies 規(guī)格： 48T
CETP(Mouse cholest erolester transfer protein)ELISA Kit 小鼠*酯轉(zhuǎn)移蛋白 Multi-class antibodies 規(guī)格： 48T
LH(Mouse luteotropic hormone)ELISA Kit 小鼠促黃體激素 Multi-class antibodies 規(guī)格： 48TKLHL36 英文名稱： Kelch樣蛋白36抗體 ?0.2ml
KCC4 英文名稱： 鉀氯離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白KCC4抗體 ?0.2ml
phospho-KCNA3(Tyr135) 英文名稱： 磷酸化離子通道蛋白Kv1.3抗體 ?0.1ml
KCNE4 英文名稱： 鉀離子通道蛋白家族成員4抗體 ?0.2ml
KCNF1 英文名稱： 電壓門控鉀通道蛋白亞基kv5.1抗體 ?0.2ml
KCNG1 英文名稱： 電壓門控鉀通道蛋白亞基kv6.1抗體 ?0.2ml
KCNG3 英文名稱： 電壓門控鉀通道蛋白亞基KV6.3抗體 ?0.2ml
phospho-KCNJ1(Ser44) 英文名稱： 磷酸化細(xì)胞內(nèi)流鉀通道蛋白KCNJ1抗體 ?0.1ml
KCNT2 英文名稱： 鈣激活鉀通道蛋白KCNT2抗體 ?0.2ml
KIR5.1 英文名稱： 細(xì)胞內(nèi)流鉀通道蛋白Kir5.1抗體 ?0.2ml
phospho-KIR5.1(Ser416) 英文名稱： 磷酸化細(xì)胞內(nèi)流鉀通道蛋白Kir5.1抗體 ?0.1ml
phospho-Kir6.2(Thr224) 英文名稱： 磷酸化ATP敏感鉀通道亞基kir6.2抗體 ?0.1ml
KCNA2B 英文名稱： 電壓門控鉀通道蛋白KVβ.2抗體 ?0.2ml
Kv1.4 英文名稱： 電壓門控鉀通道蛋白Kv1.4抗體 ?0.2ml
Kv1.6 英文名稱： 電壓門控鉀通道Kv1.6抗體 ?0.2ml
