細(xì)胞名稱  EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞；HH-01培養(yǎng)
形態(tài)特性   淋巴母細(xì)胞樣
生長特性  懸浮生長
特征特性   該細(xì)胞系來源于一成年男性的外周血。2010年由中科院昆明細(xì)胞庫通過EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。 
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  15%NBS
傳代方法   1:2傳代；5-6天一次
傳代情況  P3
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  熒光法（-）
STR   -
同工酶  
染色體  
使用權(quán)限  A類

 復(fù)蘇操作要點(diǎn)： 
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。 
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。 
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。 
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
 操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
phospho-JNK1 + 2 + 3 (Thr183+Tyr185)    英文名稱：    磷酸化氨基末端激酶1/2/3抗體    ?0.1ml
Phospho-Jak1 (Tyr1022 + Tyr1023)    英文名稱：    磷酸化蛋白質(zhì)*激酶JAK-1抗體    ?0.1ml
JNK2    英文名稱：    氨基末端激酶2抗體    ?0.2ml
JMY    英文名稱：    連接介導(dǎo)調(diào)節(jié)蛋白抗體    ?0.2ml
JNK3    英文名稱：    氨基末端激酶3抗體    ?0.2ml
Phospho-JunB (Thr102 + Thr104)    英文名稱：    磷酸化活化蛋白激酶B抗體    ?0.2ml
JHD1    英文名稱：    JmjC結(jié)構(gòu)域組蛋白去甲基化酶H3-K36抗體    ?0.1ml
Jarid2    英文名稱：    組蛋白去甲基化酶JARID2抗體    ?0.2ml
JAKMIP2    英文名稱：    JAK和微管相互作用蛋白2抗體（JAK和微管相互作用蛋白2）    ?0.2ml
JunB    英文名稱：    活化蛋白激酶B抗體    ?0.1ml
phospho-JAK2(Tyr1007+Tyr1008)    英文名稱：    磷酸化蛋白*激酶JAK-2抗體    ?0.1ml
JMJD6    英文名稱：    凋亡細(xì)胞清除受體抗體    ?0.2ml-T4(Mouse Ultrasensitivity Thyroxine) ELISA Kit  小鼠高敏甲狀腺素    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
BetaGD(Mouse Beta-glucuronidase) ELISA Kit  小鼠β葡萄糖醛酸苷酶    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
GAD-Ab(Mouse glutamic acid decarboxylase autoantibody) ELISA Kit  小鼠*脫羧酶自身抗體    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
ER(Mouse Estradiol receptor) ELISA Kit  小鼠雌二醇受體    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
PTHrP(Mouse Parathyroid Hormone Related Protein) ELISA Kit  小鼠甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
LPA(Mouse L-phenylalanine) ELISA Kit  小鼠苯*    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
ACA-IgA(Mouse anti-cardiolipin antibody IgA) ELISA Kit  小鼠抗心磷脂抗體IgA    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
 ACA-IgM(Mouse anti-cardiolipin antibody IgM) ELISA Kit  小鼠抗心磷脂抗體IgM    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
ACA-IgG(Mouse anti-cardiolipin antibody IgG) ELISA Kit  小鼠抗心磷脂抗體IgG    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T