細(xì)胞名稱(chēng)  EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞；KMY1036使用說(shuō)明書(shū)一
形態(tài)特性   淋巴母細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性  懸浮生長(zhǎng)
特征特性   該細(xì)胞系來(lái)源于一無(wú)精癥男性的外周血。2010年由中科院昆明細(xì)胞庫(kù)通過(guò)EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。 
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  15%NBS
傳代方法   1:2傳代；5-6天一次
傳代情況  P2
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè)  熒光法（-）
STR   -
同工酶  
染色體  
使用權(quán)限  A類(lèi)

復(fù)蘇操作要點(diǎn)： 
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。 
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。 
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。 
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
操作步驟：
1. 將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周?chē)疂n吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
IRAK2    英文名稱(chēng)：    白介素-1受體相關(guān)激酶2抗體    ?0.2ml
Phospho-Insulin Receptor Beta (Tyr1355)    英文名稱(chēng)：    磷酸化胰島素受體β抗體    ?0.1ml
Phospho-Insulin Receptor Beta (Tyr1361)    英文名稱(chēng)：    磷酸化胰島素受體β抗體    ?0.1ml
Integrin alpha E2    英文名稱(chēng)：    整合素alpha E2 抗體    ?0.1ml
Integrin Alpha V    英文名稱(chēng)：    整合素αV抗體    ?0.2ml
IGBP1    英文名稱(chēng)：    免疫球蛋白結(jié)合蛋白1抗體    ?0.2ml
phospho-IGF1R (Tyr1346)    英文名稱(chēng)：    胰島素樣生長(zhǎng)因子1受體抗體    ?0.1ml
IGFBPL1    英文名稱(chēng)：    胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白樣1抗體    ?0.2ml
IGHD    英文名稱(chēng)：    免疫球蛋白D重鏈保守區(qū)抗體    ?0.2ml
IGLK    英文名稱(chēng)：    IV型己糖激酶抗體    ?0.2ml
IGLL1    英文名稱(chēng)：    免疫球蛋白lambda樣肽1抗體    ?0.2mlDHEA(Mouse Dehydroepiandrosterone) ELISA Kit  小鼠脫氫表雄酮    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
HMGB-1(Mouse High mobility group protein B1) ELISA Kit  小鼠高遷移率族蛋白B1    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
EL(Mouse Endothelial lipase) ELISA Kit  小鼠內(nèi)皮脂肪酶    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
CA(Mouse carbonic anhydrase) ELISA Kit  小鼠碳酸酐酶    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
CGRP(Mouse calcitonin gene related peptide) ELISA Kit  小鼠降鈣素基因相關(guān)肽    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
MTL(Mouse Motilin) ELISA Kit  小鼠胃動(dòng)素    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
SS(Mouse Somatostatin) ELISA Kit  小鼠*    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Fbg(Mouse Fibrinogen) ELISA Kit  小鼠血纖蛋白原    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
PAF(Mouse plaet activating factor) ELISA Kit  小鼠血小板活化因子    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
sm Actinin- Alpha(Mouse skeletal muscle Actinin- Alpha) ELISA Kit  小鼠橫紋肌輔肌動(dòng)蛋白α    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
MYS(Mouse Myosin) ELISA Kit  小鼠肌球蛋白    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
MHC I /H-2 I (Mouse major histocompatibility complex I ) ELISA Kit  小鼠主要組織相容復(fù)合體Ⅰ類(lèi)    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
GATA4Mouse GATA binding protein 4) ELISA Kit  小鼠GATA結(jié)合蛋白4    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
IP-10/CXCL10(Mouse interferon-inducible protein 10) ELISA Kit  小鼠干擾素誘導(dǎo)蛋白10    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
ENA-78/CXCL5(Mouse Epithelial neutrophil activating peptide 78) ELISA Kit  小鼠上皮中粒細(xì)胞活化肽78    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T