【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細胞名稱  EB病毒轉化的人B淋巴細胞；KMY1008培養(yǎng)
形態(tài)特性   淋巴母細胞樣
生長特性  懸浮生長
特征特性   該細胞系來源于一成年男性的外周血。2010年由中科院昆明細胞庫通過EB病毒轉化的方法建立。 
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  15%NBS
傳代方法   1:2傳代；5-6天一次
傳代情況  P2
凍存條件   基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  熒光法（-）
STR   -
同工酶  
染色體  
使用權限  A類

復蘇操作要點： 
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。 
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。 
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。 
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。 
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。 
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
IFIT1     英文名稱：    干擾素誘導的三角形四肽重復蛋白1抗體    ?0.2ml
IDH3G    英文名稱：    異檸檬酸脫氫酶gamma亞基抗體    ?0.2ml
IDN3    英文名稱：    Bipped B樣蛋白抗體    ?0.2ml
Iduronate 2 sulfatase    英文名稱：    艾杜糖-2-硫酸酯酶抗體    ?0.2ml
IDUA    英文名稱：    α-L-艾杜糖苷酶抗體    ?0.2ml
IFT122    英文名稱：    細胞纖毛內轉運同源蛋白122抗體    ?0.2ml
IFT140    英文名稱：    細胞纖毛內轉運同源蛋白140抗體    ?0.2ml
IFT20    英文名稱：    細胞纖毛內轉運同源蛋白20抗體    ?0.2ml
IFT43    英文名稱：    細胞纖毛內轉運同源蛋白43抗體    ?0.2ml
IFT80    英文名稱：    細胞纖毛內轉運同源蛋白80抗體    ?0.2ml
CD101    英文名稱：    CD101抗體    ?0.1ml
IGSF5    英文名稱：    免疫球蛋白超家族成員5抗體    ?0.2ml
IFI27L2    英文名稱：    alpha干擾素誘導蛋白27樣蛋白2抗體    ?0.2ml
Insulin    英文名稱：    胰島素抗體    ?0.1mlVCAM-1/CD106(Mouse Vascuolar cell adhesion molecule 1) ELISA Kit  小鼠血管內皮細胞粘附分子1    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
GR(Mouse glucocorticoid receptor) ELISA Kit  小鼠糖皮質類固醇受體    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
LHRH(Mouse Luteinizing Hormone-Releasing Hormone) ELISA Kit  小鼠黃體生成素釋放激素    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
NGB(Mouse Neuroglobin) ELISA Kit  小鼠腦紅蛋白    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
8-iso-PG(Mouse 8-iso prostaglandin) ELISA Kit  小鼠8異前列腺素    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
IFI16/p16(Mouse interferon-inducible protein 16) ELISA Kit  小鼠γ干擾素誘導蛋白16/p16    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
SDF-1a/CXCL12(Mouse Stromal cell derived factor 1a) ELISA Kit  小鼠基質細胞衍生因子1a    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
VEGF(Mouse Vascular Endothelial cell Growth Factor) ELISA Kit  小鼠血管內皮細胞生長因子    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
GMP-140(Mouse alpha-granular membrane protein) ELISA Kit  小鼠血漿α顆粒膜蛋白    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
MPO(Mouse myeloperoxidase) ELISA Kit  小鼠髓過氧化物酶    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Gzms-B(Mouse granzymes B) ELISA Kit  小鼠顆粒酶B    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
VEGFR-1/Flt1(Mouse Vascuoar endothelial cell growth factor receptor 1) ELISA Kit  小鼠血管內皮細胞生長因子受體1    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T