細(xì)胞名稱 人正常肺上皮細(xì)胞;BEAS-2B
形態(tài)特性 上皮細(xì)胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 從一位非癌個體的正常人支氣管上皮病理切片分離出上皮細(xì)胞。 這些細(xì)胞用腺病毒12-SV40病毒雜交病毒感染并克隆。 DEAS-2B細(xì)胞保留了對血清反應(yīng)進(jìn)行鱗關(guān)分化的能力,并有用于篩選誘導(dǎo)或影響分化及致癌的化學(xué)或生物制劑。 細(xì)胞角蛋白及SV40抗原染色陽性。
培養(yǎng)條件
傳代方法 消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。
傳代情況 P(39+5)
凍存條件 *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
產(chǎn)品圖片:
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實際需要進(jìn)行人為的控制,同時,可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時,可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
匹克氏肉湯基礎(chǔ) 規(guī)格: 100g 作用: 用于溶血性鏈球菌的增菌培養(yǎng)(參考GB/T4789.28-2003 中4.62,GB/T4789.11-2003)。 英文名稱: CD36
肉浸液肉湯 規(guī)格: 250g 作用: 用于金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌和蠟樣芽孢桿菌的培養(yǎng)(GB標(biāo)準(zhǔn)) 英文名稱: KLK11
葡萄糖肉浸液肉湯 規(guī)格: 250g 作用: 用于溶血性鏈球菌及其它營養(yǎng)要求較高的細(xì)菌的增菌培養(yǎng)(GB/T4789.28-2003 中4.1 GB/T4789.11-2... 英文名稱: CD97
哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基 規(guī)格: 250g 作用: 用于營養(yǎng)要求較高的細(xì)菌的培養(yǎng)及溶血試驗,還用于藥品中梭菌的檢測。(《中華人民共和國藥典》201... 英文名稱: NTRK3
血瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ) 規(guī)格: 250g 作用: 加入脫纖維羊血或兔血,制成血瓊脂培養(yǎng)基,用于營養(yǎng)要求較高的細(xì)菌的培養(yǎng)及溶血試驗(GB 4789.10-... 英文名稱: HA
胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基 規(guī)格: 250g 作用: 可廣泛應(yīng)用于細(xì)菌的培養(yǎng),特別用于消毒劑消毒效果的測試、金黃色葡萄球菌的非選擇性增菌培養(yǎng)及蠟... 英文名稱: HA
Fraser肉湯增菌液FB1配套試劑 規(guī)格: 2x5支 作用: 試劑A和試劑B各一支添加于225ml(026080)中配成FB1增菌液。 英文名稱: SPARCL1
PALCAM瓊脂凍干配套試劑 規(guī)格: 10支 作用: 每支添加于100ml(026070)中配成PALCAM瓊脂。 英文名稱: IL1RL1
李氏增菌液LB2凍干配套試劑 規(guī)格: 10支 作用: 每支添加于200ml(026040)中配成LB2增菌液。 英文名稱: IL13RA1
李氏增菌液LB1凍干配套試劑 規(guī)格: 10支 作用: 每支添加于225ml(026040)中配成LB1增菌液。 英文名稱: PECAM1
EB增菌液凍干配套試劑 規(guī)格: 10支 作用: 每支添加于225ml(026010)中配成EB增菌液。 英文名稱: TNF
選址素(抗原)
Mac-1 (Mac-1/CR3/CD11b+CD18 0.5mg 巨噬細(xì)胞表面分子抗原 Mac-1 (Mac-1/CR3/CD11b+CD18) 巨噬細(xì)胞表面分子抗原
M2-PK ( pyruvate Kinase M2 0.5mg M2-PK ( pyruvate Kinase M2) 丙酮酸激酶-M2(抗原)
M2-PK ( pyruvate Kinase M2 0.5mg M2-PK ( pyruvate Kinase M2 ) 丙酮酸激酶-M2(抗原)
LYVE-1(lymphalic vessel endotheilial hyaluronan receptor 1 0.5mg 淋巴管內(nèi)皮透明質(zhì)酸受體抗原 LYVE-1(lymphalic vessel endotheilial hyaluronan receptor 1) 淋巴管內(nèi)皮透明質(zhì)酸受體抗原
Lumbrokinase 蚯蚓纖溶酶(蚓激酶抗原 0.5mg Lumbrokinase 蚯蚓纖溶酶(蚓激酶抗原)
LRP/MVP (Lung resistance related protein 0.5mg LRP/MVP (Lung resistance related protein) 肺耐藥相關(guān)蛋白(抗原)
LPLUNC1 人鼻咽癌癌基因多肽抗原 0.5mg LPLUNC1 人鼻咽癌癌基因多肽抗原
Anti-WNT9A/WNT14/FITC 熒光素標(biāo)記信號通路Wnt9a抗體IgG
Anti-WNT10A/FITC 熒光素標(biāo)記信號通路WNT10A抗體IgG
Anti-WRCH-1/FITC 熒光素標(biāo)記WRCH1抗體IgG
K1/FITC 熒光素標(biāo)記賴氨酸缺陷型蛋白激酶1抗體IgG
人正常肺上皮細(xì)胞;BEAS-2BAnti-WNK3 protein/FITC 熒光素標(biāo)記絲氨酸/蘇氨酸激酶家族成員的基因WNK3抗體IgG
Anti-WNK4/FITC 熒光素標(biāo)記一種新的絲氨酸/蘇氨酸激酶家族成員的基因WNK4抗體IgG
Anti-Il-7R a(CD127)/RBITC 羅丹明標(biāo)記白細(xì)胞介素-7受體a抗體IgG
Anti-IL-17/RBITC(Interle
操作方法:
1. 從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA (質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物) 并用手EP管底輕輕混勻 (避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入0.9 mL室溫S.O.C.或LB培養(yǎng)基(S.O.C.營養(yǎng)豐富,可提高轉(zhuǎn)化效率)。
4. 37℃,225 rpm復(fù)蘇60分鐘或30℃,225 rpm復(fù)蘇90分鐘。
(當(dāng)質(zhì)粒中含有不穩(wěn)定片段時,30℃培養(yǎng)可降低錯誤重組的概率,若轉(zhuǎn)化control pUC19計算轉(zhuǎn)化效率,則需37℃,225 rpm復(fù)蘇60分鐘)
5. 5000rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的S.O.C. 或LB培養(yǎng)基上。