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上海士鋒生物科技有限公司
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15 2015-7

士鋒豆粕中尿素酶活性的測(cè)定

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆諟y(cè)定尿素酶活性的各種方法的基本原理及方法步驟。二、實(shí)驗(yàn)原理將粉碎的大豆制品與中性尿素緩沖溶液混合,在30℃保持30min后,尿素酶催化尿素水解產(chǎn)生氨的反應(yīng)。用過(guò)量的鹽酸溶液中和所產(chǎn)生的...

7 2015-7

士鋒凝膠層析法脫鹽和分離蛋白質(zhì)

(一)原理凡鹽析所獲得的粗制蛋白質(zhì)(鹽析得到的IgG)中均含有硫酸銨等鹽類(lèi),這類(lèi)將影響以后的純化,所以純化前均應(yīng)除去,此過(guò)程稱(chēng)為“脫鹽”(desalthing)。脫鹽常用透析法和凝膠過(guò)濾法,這兩種方法...

29 2015-6

士鋒雙向電泳完整操作步驟

一、*向等電聚焦1.從冰箱中取-20℃冷凍保存的水化上樣緩沖液(I)(不含DTT,不含Bio-Lyte)一小管(1ml/管),置室溫溶解。2.在小管中加入0.01gDTT,Bio-Lyte4-6、5-...

23 2015-6

考馬斯亮蘭法(Bradford法)測(cè)定蛋白濃度

一、實(shí)驗(yàn)原理雙縮脲法(Biuret法)和Folin―酚試劑法(Lowry法)的明顯缺點(diǎn)和許多限制,促使科學(xué)家們?nèi)ふ腋玫牡鞍踪|(zhì)溶液測(cè)定的方法。1976年由Bradford建立的考馬斯亮蘭法(Brad...

17 2015-6

硝酸纖維素膜與PVDF膜的區(qū)別

1.硝酸纖維素膜硝酸纖維素膜是蛋白印跡zui廣泛使用的轉(zhuǎn)移介質(zhì),對(duì)蛋白有很強(qiáng)的結(jié)合能力,而且適用于各種顯色方法,包括同位素,化學(xué)發(fā)光(Luminol類(lèi))、常規(guī)顯色、染色和熒光顯色;背景低,信噪比高。N...

11 2015-6

醋酸纖維薄膜電泳分離血清蛋白

實(shí)驗(yàn)原理醋酸纖維薄膜電泳是用醋酸纖維薄膜作為支持物的電泳方法。它具有簡(jiǎn)便、快速、樣品用量少,應(yīng)用范圍廣,分離清晰,沒(méi)有吸附現(xiàn)象等優(yōu)點(diǎn)。目前已廣泛用于血清蛋白、脂蛋白、血紅蛋白、糖蛋白、多肽、核酸、同工...

9 2015-6

醋酸纖維素薄膜電泳簡(jiǎn)介

醋酸纖維薄膜電泳(celluloseacetatemembranceelectrophoresis)以醋酸纖維薄膜為支持物。它是纖維素的醋酸酯,由纖維素的羥基經(jīng)乙?;瞥?。它溶于丙酮等有機(jī)溶液中,即...

3 2015-6

蛋白樣品的定量

目前常用比色法測(cè)定樣品蛋白的含量:Bradford法(考馬斯亮藍(lán)法)、Lowry法(Folin-酚試劑法)、BCA法等。但各有優(yōu)缺點(diǎn),大家可以根據(jù)具體情況選取。按相應(yīng)蛋白質(zhì)定量試劑盒操作說(shuō)明操作,測(cè)定...

29 2015-5

雙向電泳樣品制備程序

一、培養(yǎng)細(xì)胞(culturecell)樣品處理方法:培養(yǎng)動(dòng)物組織細(xì)胞由于沒(méi)有細(xì)胞壁,因此可以將細(xì)胞收集下來(lái),直接加入裂解緩沖液(Lysisbuffer)抽提總蛋白。裂解緩沖液有多種配方,本實(shí)驗(yàn)室主要采...

25 2015-5

四種紫外吸收法測(cè)蛋白質(zhì)含量

1.280nm的光吸收法因蛋白質(zhì)分子中的酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸在280nm處具有zui大吸收,且各種蛋白質(zhì)的這三種氨基酸的含量差別不大,因此測(cè)定蛋白質(zhì)溶液在280nm處的吸光度值是zui常用的紫外吸...

21 2015-5

蛋白質(zhì)含量測(cè)定的方法(Bradford 方法)

原理:這一方法基于考馬斯亮藍(lán)G-250有紅藍(lán)兩種不同的形式。在一定濃度的乙醇及酸性條件下,可配成淡紅色的溶液,當(dāng)與蛋白質(zhì)結(jié)合后,產(chǎn)生藍(lán)色化合物,反應(yīng)迅速而穩(wěn)定。反應(yīng)化合物在465-595nm處有zui...

20 2015-5

微管蛋白的可溶性表達(dá)及純化

1、將重組質(zhì)粒(BL21-2?2或Rossatta-2?2)的表達(dá)菌37℃搖培過(guò)夜后,1:20擴(kuò)配(約需1h15m);2、至OD600=0.5~0.7時(shí)(約1h15min~1h45min),在15-(...

19 2015-5

血清蛋白瓊脂糖凝膠電泳

瓊脂糖(agarose)是經(jīng)過(guò)挑選,以質(zhì)地較純的瓊脂(agar)作為原料而制成的。瓊脂在化學(xué)上是由瓊脂糖和瓊脂膠組成的復(fù)合物。瓊脂膠是一含有硫酸根和羥基的多糖,它具有離子交換性質(zhì),這種性質(zhì)會(huì)給電泳及凝...

13 2015-5

離子交換層析純化超氧化物歧化酶

本實(shí)驗(yàn)利用超氧化物歧化酶的解離性質(zhì),在一定緩沖液條件下與離子交換纖維素吸附和解吸的能力不同于溶液中雜蛋白,進(jìn)而除去雜蛋白。實(shí)驗(yàn)中選用DE-32離子交換纖維素。相關(guān)原理請(qǐng)參見(jiàn)實(shí)驗(yàn)教材中離子交換層析一章。...

7 2015-5

幾種分子篩凝膠及應(yīng)用

做純化的人可能經(jīng)常接觸到sephadex,BIO-Gel,sephacryls-,sepharoseBIo-Gel等幾種填料,有時(shí)會(huì)混淆在一起,看到一個(gè)貼子較好的介紹了這些填料的區(qū)別,希望對(duì)大家有用。...

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