細(xì)胞名稱  人成巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞；MEG-01使用說明書
形態(tài)特性   淋巴母細(xì)胞樣
生長特性  懸浮生長
特征特性   MEG-01細(xì)胞株源自一位CML患者成巨核細(xì)胞轉(zhuǎn)換期的骨髓細(xì)胞。 細(xì)胞質(zhì)因子VIII和表面球蛋白IIb/IIIa，高碘酸-Schiff(PAS)反應(yīng)，α醋酸萘酯酶和酸性磷酸酶陽性。 髓過氧化物酶，α丁酸萘酯酶，氯化醋酸AS-D萘*酯酶和堿性磷酸酶陰性。 用單克隆抗體BA-1(抗B細(xì)胞，粒性白細(xì)胞)，HPL-3(抗球蛋白IIb/IIIa)和20.3(抗單核細(xì)胞，血小板)染色成陽性。 其他淋巴和骨髓類抗體成陰性。 
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%
傳代方法   1:2。3天內(nèi)可長滿。
傳代情況  U
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  陽性
STR  
同工酶  
染色體  
使用權(quán)限  B類

復(fù)蘇操作要點： 
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。 
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。 
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。 
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
Z2 Cys Peroxiredoxin    英文名稱：    硫氧還蛋白還原酶抗體    ?0.1ml
5HT2C Receptor    英文名稱：    5-羥色胺受體2C抗體    ?0.1ml
5HT5B Receptor    英文名稱：    5-羥色胺受體5B抗體    ?0.1ml
SRRM4    英文名稱：    */*相關(guān)核基質(zhì)蛋白4抗體    ?0.2ml
SRRM3    英文名稱：    */*相關(guān)核基質(zhì)蛋白3抗體    ?0.2ml
phospho-CK II beta (Ser209)    英文名稱：    磷酸化*/*蛋白激酶II β(casein kinase IIβ)抗體    ?0.1ml
MOP5    英文名稱：    單核細(xì)胞蛋白5抗體    ?0.2ml
SAMD9    英文名稱：    SAMD9蛋白抗體    ?0.2ml
SARM1    英文名稱：    SARM1蛋白抗體    ?0.2ml
p150 CAF1    英文名稱：    染色質(zhì)組裝因子1P155抗體    ?0.2ml普通瓊脂斜面培養(yǎng)基(PH8.0-8.2)          250    分離培養(yǎng)霍亂弧菌，*檢定用
酪胨瓊脂        Peptone from Casein Agar    250    用于生物制品無菌試驗
葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基      Dextrose Peptone Medium    250    用于生物制品無菌試驗
抗生素檢定培養(yǎng)基4號        Antibiotic Agar No.4    250    用于*等的效價測定
抗生素檢定培養(yǎng)基6號        Antibiotic Agar No.6    250    用于粘菌素等的效價測定
抗生素檢定培養(yǎng)基7號         Antibiotic Agar No.7    250    用于*鈉等的效價測定
抗生素檢定培養(yǎng)基8號         Antibiotic Agar No.8    250    用于去甲*等的效價測定
卵黃高鹽瓊脂基礎(chǔ)       Egg-Yolk Salt Agar Base    250    用于生物制品*選擇性分離
抗生素5號      Antibiotic No.5    250    用于*檢定菌種培養(yǎng)
MUG培養(yǎng)基       MUG Medium    100    用于大腸桿菌測定
真菌瓊脂培養(yǎng)基       Fungi Agar Medium    250    用于無菌生長試驗