細胞傳代步驟：
如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細胞簡介：
人口腔黏膜成纖維分離自口腔黏膜組織；口腔各壁都有黏膜覆蓋，口腔黏膜在組織學(xué)上由上皮和固有層組成，并借黏膜下層與深部組織相連?？谇火つさ那胺脚c唇部皮膚相連，后面與咽部黏膜相延續(xù)，是消化道的前端，因此其結(jié)構(gòu)和功能具有皮膚和消化道黏膜的某些特點。人口腔黏膜成纖維主要來自口腔黏膜固有層組織。成纖維細胞是結(jié)締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質(zhì)透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
方法簡介：
實驗室分離的人口腔黏膜成纖維采用 - 膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
實驗室分離的人口腔黏膜成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | |
組織來源 | 口腔黏膜 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X8299 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 |
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：成纖維細胞樣
傳代特性：可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
人口腔黏膜成纖維體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞復(fù)蘇步驟:
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
公司正在出售的產(chǎn)品：
大鼠成纖維細胞生長因子11(FGF11)試劑盒 ，英文名： FGF11 ELISA Kit
Human XC chemokine receptor 1 (XCR1) ELISA Kit 人XC趨化因子受體1(XCR1)試劑盒
RatCarboxyterminalpropeptideoftypeⅠprocollagen,PⅠCPELISAKit 大鼠Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforCr(MouseCrosslaps)ELISAKit小鼠骨膠原交聯(lián)
細胞血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶2(ACE2)活性熒光共振能量轉(zhuǎn)移法(FRET)定量試劑盒20次
RatCystatinC,Cys-CELISAKit大鼠半胱蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)試劑盒規(guī)格：96T/48T
乳酸（LD）（血清、組織）檢測 Lactic acid (LD) (whole blood) detection
乳酸（LD）（全血）檢測 Lactate dehydrogenase (LDH) detection
乳酸脫氫酶（LDH）檢測 ATP enzyme (sodium and potassium, calcium and ATP enzyme) detection
ATP酶（、鈣ATP酶）檢測 Any one, sodium potassium calcium and ATP enzyme detection
MS4A12蛋白抗體
豚鼠巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)試劑盒 ，英文名： M-CSF ELISA Kit
Human apoptosis protease activating factor 1 (ICAD) ELISA Kit 人凋亡蛋白酶激活因子1(ICAD)試劑盒
Monkeymonocytechemotacticprotein1/monocytechemotacticandactivatingfactor,MCP1/MCAFELISAkit單核細胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforBFP(Humanbasicfetoprotein,BFP)ELISAKit人堿性胎兒蛋白
細菌氫ATP酶(H+-ATPase)活性比色法定量試劑盒20次
rabbitIerleukin8,IL-8ELISAKit兔子白介素8(IL-8/CXCL8)試劑盒規(guī)格：96T/48T
核仁蛋白10抗體
CD59重組食蟹猴 CD59 / CD59A / MAC-IP 蛋白 Protein
KT3 tag KT3 tag標簽抗原 0.5mgKT3 tag KT3 tag標簽抗原
CPLX2重組人 Complexin-2 / CPLX2 蛋白 Protein
IL1R1 Protein Human 重組人 IL1R1 / CD121a 蛋白
IgG2a Protein Mouse 重組小鼠 IgG2a-Fc 蛋白
人口腔黏膜成纖維細胞KT3 tag KT3 tag標簽抗原 0.5mgKT3 tag KT3 tag標簽抗原
IL1R1 Protein Human 重組人 IL1R1 / CD121a 蛋白
CD59重組食蟹猴 CD59 / CD59A / MAC-IP 蛋白 Protein
IgG2a Protein Mouse 重組小鼠 IgG2a-Fc 蛋白
CPLX2重組人 Complexin-2 / CPLX2 蛋白 Protein
細胞凍存步驟:
待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例；
1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
