細胞傳代步驟：
如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細胞簡介：
人子宮平滑肌分離自子宮組織；子宮是孕育胎兒的器官，位于盆腔中部，膀胱與直腸之間，其位置可隨膀胱與直腸的充盈程度或體位而有變化。子宮的正常位置主要依靠子宮諸韌帶、盆膈、尿生殖膈及會陰中心腱等結構維持，這些結構受損或松弛時，可以引起子宮脫垂。子宮肌層比較厚，由成束或成片的平滑肌組成，肌束間以結締組織分隔。子宮平滑肌具有收縮功能，收縮受激素的調節(jié)，其收縮活動有助于向輸卵管運送、經(jīng)血排出以及胎兒娩出。子宮平滑肌層含有大量的血管，如果平滑肌層細胞過度生長，勢必造成血管壁的增厚，管腔堵塞，體外培養(yǎng)平滑肌細胞有利于研究子宮和其他富含血管器官的血管形成機制。子宮平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數(shù)細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網(wǎng)狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點。子宮平滑肌細胞的主要功能：①子宮平滑肌能保持子宮的基本形態(tài)，在孕期能大化的擴張子宮容積，保證胎兒孕育環(huán)境；②平滑肌細胞有收縮舒張能力，在生產(chǎn)時能形成生理性的縮腹環(huán)，推動胎兒向下移動，輔助生產(chǎn)。
方法簡介：
公司實驗室分離的人子宮平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結合組織貼塊法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測：
公司實驗室分離的人子宮平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | |
組織來源 | 子宮組織 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X7209 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 |
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞復蘇步驟:
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
公司正在出售的產(chǎn)品：
大鼠酰胺腺嘌呤二核苷酸0酸(NAADP)試劑盒 ，英文名： NAADP ELISA Kit
Mouse thrombin receptor () ELISA Kit 小鼠受體()試劑盒
MouseErythropoietieceptor,EPORELISAKit 小鼠紅細胞生成素受體(EPOR)試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforHumanCompleme4,C4ELISAKit人補體蛋白4
細胞CASEINKINASE1激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次
ELISAKitLebtospira大鼠鉤端IgG
小鼠內脂素/內臟脂肪素(visfatin)試劑盒 96T/48T
小鼠內臟脂肪特異性絲酸蛋白酶抑制劑(vaspin)試劑盒 96T/48T
小鼠內皮脂肪酶(EL)試劑盒 96T/48T
小鼠內皮抑素(ES)試劑盒 96T/48T
髓細胞/淋巴細胞或混合譜系白血病蛋白6抗體
小鼠熱休克因子1(HSF1)ELISA 試劑盒 96T/48T
Human brain naiuretic peptide / brain naiuretic peptide (BNP) ELISA Kit 人腦素/腦尿肽(BNP)試劑盒
HumanEsogen-inducedproteinpS2ELISAKit 人雌激素誘導蛋白PS2試劑盒 96T/48T 進口分裝
guineapigIerferonγ,IFN-γ試劑盒豚鼠γ干擾素(IFN-γ)試劑盒規(guī)格：96T/48T
真菌/酵母細胞β-半乳糖苷酶活性化學發(fā)光法定量試劑盒20次
MouseCarboxyterminalpropeptideoftypeⅠprocollagen,PⅠCPELISAKit小鼠Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)試劑盒規(guī)格：96T/48T
BRPF3蛋白抗體
IgG2a重組小鼠 IgG2a-Fc 蛋白 Protein
胞外超氧化物歧化酶(SOD3)重組蛋白 Recombinant Superoxide Dismutase 3, Extracellular (SOD3)
AKR1C2重組人 AKR1C2 蛋白 Protein
CPLX2 Protein Human 重組人 Complexin-2 / CPLX2 蛋白
CD59 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD59 / CD59A / MAC-IP 蛋白
人子宮平滑肌細胞alpha Adaptin/AP1 銜接蛋白α抗原 0.5mgalpha Adaptin/AP1 銜接蛋白α抗原
CPLX2 Protein Human 重組人 Complexin-2 / CPLX2 蛋白
IL6ST重組小鼠 IL6ST / gp130 / CD130 蛋白 Protein
BST1 Protein Rat 重組大鼠 CD157 / BST1 蛋白 (Fc 標簽)
C1D重組人 C1D 蛋白 (GST 標簽) Protein
細胞凍存步驟:
待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例；
1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
