細(xì)胞傳代步驟：
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
人羊膜成纖維分離自胎盤(pán)組織；胎盤(pán)（placenta）是哺乳動(dòng)物妊娠期間由胚胎的胚膜和母體子宮內(nèi)膜聯(lián)合長(zhǎng)成的母子間交換物質(zhì)的過(guò)渡性器官，由羊膜、葉狀絨毛膜和底蛻膜構(gòu)成。胎兒在子宮中發(fā)育，依靠胎盤(pán)從母體取得營(yíng)養(yǎng)，而雙方保持相當(dāng)?shù)莫?dú)立性。胎盤(pán)還產(chǎn)生多種維持妊娠的激素，是一個(gè)重要的內(nèi)分泌器官。有些爬行類和魚(yú)類也以胎生方式繁殖后代，胚胎生長(zhǎng)出一些輔助結(jié)構(gòu)如卵黃囊、鰓絲等與母體組織緊密結(jié)合，以達(dá)到母子間物質(zhì)的交換，這樣的結(jié)構(gòu)稱假胎盤(pán)。羊膜是胎盤(pán)的內(nèi)層，與眼結(jié)膜組織結(jié)構(gòu)相似，含有眼表上皮細(xì)胞，包括結(jié)膜細(xì)胞和角膜上皮細(xì)胞生長(zhǎng)所需要的物質(zhì)，其光滑，無(wú)血管、神經(jīng)及淋巴，具有一定的彈性；在電鏡下，其分為五層：上皮層、基底膜、致密層、纖維母細(xì)胞層和海綿層，羊膜基底膜和羊膜羊膜基質(zhì)層含有大量不同的膠元，主要為Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ型膠原和纖維粘連蛋白、層粘連蛋白等成份。羊膜成纖維細(xì)胞主要來(lái)自基底膜、致密層、纖維母細(xì)胞層。
方法簡(jiǎn)介：
實(shí)驗(yàn)室分離的人羊膜成纖維采用 - 膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)：
實(shí)驗(yàn)室分離的人羊膜成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | |
組織來(lái)源 | 羊膜 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X7968 |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 |
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
傳代特性：可傳3-5代左右
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
人羊膜成纖維體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞復(fù)蘇步驟:
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
公司正在出售的產(chǎn)品：
大鼠合酶運(yùn)輸因子(NOSIN)試劑盒 ，英文名： NOSIN ELISA Kit
Mouse urokinase type plasminogen activator receptor (PLAUR/uPAR) ELISA Kit 小鼠型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)試劑盒
MouseAngiopoietin1,ANG-1ELISAKit 小鼠血管生成素1(ANG-1)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforHumanCoronavirusesIgGELISAkit人流行性乙型腦抗體IgG
細(xì)胞BTK激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次
ELISAKitBMP-2大鼠骨成型蛋白2
小鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子 (mouse NGF) 作用： ELISA 規(guī)格： 96T*2 美國(guó) Chemicon
小鼠骨橋蛋白 ( mouse Osteopoin) 作用： ELISA 規(guī)格： 96T 德國(guó) IBL
小鼠血小板衍化生長(zhǎng)因子 (mouse PDGF-AA) 作用： ELISA 規(guī)格： 96T 美國(guó) R&D
小鼠血小板衍化生長(zhǎng)因子 -B(mouse PDGF-AB) 作用： ELISA 規(guī)格： 96T 美國(guó) R&D
PAM16蛋白抗體
小鼠鼠痘病毒抗體(MPV-Ab)試劑盒 96T/48T
Human measles virus IgM (MV IgM) ELISA Kit 人麻疹病毒IgM(MV IgM)試劑盒
HumaalinELISAKit 人踝蛋白(talin)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Duckmajorhistocompatibilitycomplex,MHC試劑盒鴨主要組織相容性復(fù)合體(MHC)試劑盒規(guī)格：96T/48T
藻類細(xì)胞甲磺酸乙脂突變誘導(dǎo)試劑盒10次
MouseCyclosporineA,CsAELISAKit小鼠A(CsA)試劑盒規(guī)格：96T/48T
腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體12抗體
HA重組甲型流感 H6N4 (A/chicken/HongKong/17/77) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein
PP-2A (protein phosphatase 2A 0.5mgPP-2A (protein phosphatase 2A) 蛋白質(zhì)0酸酶-2A(抗原)
USP7重組人 USP7 / HAUSP 蛋白 (aa 208-560, His & GST 標(biāo)簽) Protein
CLIC1 Protein Human 重組人 CLIC1 蛋白
NBL1 Protein Human 重組人 NBL1 / DAND1 / DAN 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
人羊膜成纖維細(xì)胞PP-2A (protein phosphatase 2A 0.5mgPP-2A (protein phosphatase 2A) 蛋白質(zhì)0酸酶-2A(抗原)
CLIC1 Protein Human 重組人 CLIC1 蛋白
HA重組甲型流感 H6N4 (A/chicken/HongKong/17/77) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein
NBL1 Protein Human 重組人 NBL1 / DAND1 / DAN 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
USP7重組人 USP7 / HAUSP 蛋白 (aa 208-560, His & GST 標(biāo)簽) Protein
細(xì)胞凍存步驟:
待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；
1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
