細(xì)胞傳代步驟：

如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

人小氣道平滑肌分離自小氣道組織；臨床上通常將內(nèi)徑小于2mm的小細(xì)支氣管稱為小氣道。小氣道具有氣流阻力小，但易阻塞的特點(diǎn)。在平靜吸氣時(shí)，空氣進(jìn)入狹窄的鼻咽部，產(chǎn)生渦流。由于小氣道已無(wú)軟骨支持，在脫離纖維鞘嵌入肺組織后，管腔通暢性不象軟骨性氣道，易于受胸腔的壓力變化的影響。小氣道上皮細(xì)胞形成連續(xù)呼吸道內(nèi)層，作為隔絕外界有害物質(zhì)的物理和功能屏障發(fā)揮著的作用。小氣道位于肺泡和氣管的交界處，這些細(xì)胞在功能上能夠調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)、產(chǎn)生化學(xué)因子進(jìn)行宿主防御、表達(dá)粘附分子，并可能通過(guò)HLA-DR表達(dá)呈遞抗原；它們還能產(chǎn)生液體有助于肺液的平衡。許多呼吸道疾病，如哮喘、支氣管炎、慢性阻塞性肺病和囊性纖維化，都涉及呼吸道表面上皮細(xì)胞的破壞；小氣道上皮細(xì)胞的培養(yǎng)可為防止呼吸道擴(kuò)增疾病和重塑提供新的治療選擇。小氣道平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見(jiàn)細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng)，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn)。小氣道的生理功能特點(diǎn)：①小氣道阻力??；②氣流速度慢；③可調(diào)節(jié)控制通氣與血流比例。小氣管平滑肌細(xì)胞主要功能：①保持氣道張力維持小氣道形態(tài)；②肺小氣道進(jìn)行氣體交換，病變可引起換氣功能障礙；③炎癥、痰液阻塞或當(dāng)氣道外壓大于氣道內(nèi)壓時(shí)容易造成小氣道閉合、萎陷。小氣管平滑肌細(xì)胞與主要病生理變化：①支氣管炎；②肺氣腫；③慢性阻塞性肺疾病。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人小氣道平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人小氣道平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

細(xì)胞復(fù)蘇步驟:

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠絲蛋白結(jié)合LIM蛋白1(FBLIM1)試劑盒 ，英文名： FBLIM1 ELISA Kit

Mouse vitamin A (VA) ELISA Kit 小鼠A(VA)試劑盒

RatProgesterone,PROGELISAkit 大鼠孕激素/孕酮(PROG)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHGH(Humangrowthhormone)ELISAKIT人生長(zhǎng)激素

細(xì)胞SPHK1激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKiX大鼠Ⅰ型膠原N末端肽

小鼠瘦素(LEP)試劑盒   96T/48T

小鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化因子(ECF)試劑盒   96T/48T

小鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白Eotaxin2(Eotaxin2/CCL24)試劑盒   96T/48T

小鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白Eotaxin1(Eotaxin1/CCL11)試劑盒   96T/48T

原鈣粘附蛋白β6抗體

小鼠酸激酶M2型同工酶(M2-PK)ELISA 試劑盒 96T/48T

One set of membrane protein (iNV) ELISA Kit 人套膜蛋白(iNV)試劑盒

Humanglycogensyhasekinase,GSKELISAKit 人糖原合成酶激酶(GSK)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanbonesialoprotein,BSP試劑盒人骨涎蛋白(BSP)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物組織胞漿超氧化物歧化酶(Cu/ZnSOD)分離試劑盒50次

HumanStaphylococalproteinA,SPAELISAKit人葡萄球菌蛋白A(SPA)試劑盒規(guī)格：96T/48T

RTL9蛋白抗體

HA重組甲型流感 H5N2 (A/ostrich/South Africa/AI1091/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

Rabbit IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記兔IgG(細(xì)胞流式同型對(duì)照 0.1mlRabbit IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記兔IgG(細(xì)胞流式同型對(duì)照)

EPHB6重組人 EphB6 / EphB6 蛋白 Protein

CLCF1 Protein Human 重組人 NNT1 / CLCF1 / CLC 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

ERBB4 Protein Human 重組人 HER4 / ErbB4 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)

人小氣道平滑肌細(xì)胞Rabbit IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記兔IgG(細(xì)胞流式同型對(duì)照 0.1mlRabbit IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記兔IgG(細(xì)胞流式同型對(duì)照)

CLCF1 Protein Human 重組人 NNT1 / CLCF1 / CLC 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

HA重組甲型流感 H5N2 (A/ostrich/South Africa/AI1091/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

ERBB4 Protein Human 重組人 HER4 / ErbB4 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)

EPHB6重組人 EphB6 / EphB6 蛋白 Protein

細(xì)胞凍存步驟:

待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例； 
1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。