細(xì)胞傳代步驟：
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細(xì)胞簡介：
大鼠脈絡(luò)膜黑色素分離自眼球脈絡(luò)膜組織；脈絡(luò)膜在視網(wǎng)膜和鞏膜之間，含有豐富血管和色素細(xì)胞，對外力沖擊的耐受性較視網(wǎng)膜差，當(dāng)眼球受到從前面來的外力的沖擊作用通過玻璃體傳到后極部時，堅(jiān)硬的鞏膜在其外面又有抵抗作用，使脈絡(luò)膜在內(nèi)外兩種作用夾攻下而發(fā)生破裂和出血。脈絡(luò)膜呈暗褐色，圍繞視神經(jīng)乳頭部有照膜，為青綠色帶金屬光澤的三角形區(qū)。脈絡(luò)膜是眼球中膜的后2/3處的薄膜，由纖維組織、小血管和毛細(xì)血管組成，軟而薄，棕紅色，在鞏膜和視網(wǎng)膜之間，續(xù)連于睫狀體后方。脈絡(luò)膜的血循環(huán)營養(yǎng)視網(wǎng)膜外層，其含有的豐富色素起遮光暗房作用。主要功能是營養(yǎng)視網(wǎng)膜外層及玻璃體，并有遮光作用，使反射的物象清楚。同時對視覺系統(tǒng)起保護(hù)作用，對整個視覺神經(jīng)有調(diào)節(jié)作用。續(xù)連于睫狀體后方，含豐富的血管和色素細(xì)胞，有營養(yǎng)和遮光作用。
方法簡介：
實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠脈絡(luò)膜黑色素先用消化、后-膠原酶混合消化結(jié)合專用培養(yǎng)基篩選法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠脈絡(luò)膜黑色素經(jīng)Dopa染色檢測，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | |
組織來源 | 脈絡(luò)膜 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X8245 |
生長特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 長梭形 |
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：長梭形
傳代特性：可傳1-2代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
大鼠脈絡(luò)膜黑色素體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞復(fù)蘇步驟:
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
公司正在出售的產(chǎn)品：
大鼠細(xì)胞胱硫醚γ裂解酶(CSE)試劑盒 ，英文名： CSE ELISA Kit
Mouse retinol binding protein (RBP) ELISA Kit 小鼠結(jié)合蛋白(RBP)試劑盒
MouseFactorⅧ-relatedAigen,FⅧAgELISAKit 小鼠第八因子相關(guān)抗原(FⅧAg)pcr檢測試劑盒分裝
CLIAKitforHSP-27(Humanheatshockprotein27)ELISAKit人熱休克蛋白27
細(xì)胞MEK1激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次
ELISAKitIL-15大鼠白介素15
小鼠抗中性?？贵w試劑盒 小鼠抗中性?？贵w試劑盒 小鼠抗中性?？贵w試劑盒，，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠抗中性?？贵w試劑盒、小鼠抗中性?？贵w試劑盒
小鼠抗增殖細(xì)胞核抗原抗體試劑盒 小鼠抗增殖細(xì)胞核抗原抗體試劑盒 小鼠抗增殖細(xì)胞核抗原抗體試劑盒，，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠抗增殖細(xì)胞核抗原抗體試劑盒、小鼠抗增殖細(xì)胞核抗原抗體試劑盒
小鼠抗血小板抗體試劑盒 小鼠抗血小板抗體試劑盒 小鼠抗血小板抗體試劑盒，，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠抗血小板抗體試劑盒、小鼠抗血小板抗體試劑盒
小鼠抗心0脂抗體試劑盒 小鼠抗心0脂抗體試劑盒 小鼠抗心0脂抗體試劑盒，，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠抗心0脂抗體試劑盒、小鼠抗心0脂抗體試劑盒
G蛋白結(jié)合蛋白7抗體
線粒體核糖體蛋白L40抗體
FETUB重組小鼠 Fetuin-B / FETUB 蛋白 Protein
APC(Activated protein C 0.5mgAPC(Activated protein C) APC活化蛋白C抗原
FGFBP3重組人 FGFBP3 蛋白 Protein
CST1 Protein Human 重組人 Cystatin SN / CST1 蛋白
EFNB3 Protein Rat 重組大鼠 Ephrin-B3 / EFNB3 蛋白
APC(Activated protein C 0.5mgAPC(Activated protein C) APC活化蛋白C抗原
CST1 Protein Human 重組人 Cystatin SN / CST1 蛋白
FETUB重組小鼠 Fetuin-B / FETUB 蛋白 Protein
EFNB3 Protein Rat 重組大鼠 Ephrin-B3 / EFNB3 蛋白
FGFBP3重組人 FGFBP3 蛋白 Protein
大鼠脈絡(luò)膜黑色素細(xì)胞小鼠內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素(visfatin)ELISA pcr檢測試劑盒
Human caneous lymphocyte associated aigen (CLA) ELISA Kit 人皮膚淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原(CLA)試劑盒
Humangasin-reliasingpeptide,GRPELISAKit 人胃泌素釋放多肽(GRP)pcr檢測試劑盒分裝
Human6-hydroxydopamine,6-OHDA試劑盒人6-羥多巴胺(6-OHDA)試劑盒規(guī)格：96T/48T
正苯基萘胺攝入法細(xì)菌膜損傷熒光試劑盒20次
MouseAi-nuclearAibody,ANAELISAKit小鼠抗核抗體(ANA)試劑盒規(guī)格：96T/48T
細(xì)胞凍存步驟:
待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；
1．細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
