細(xì)胞傳代步驟：
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
大鼠顱蓋造骨分離自顱骨組織；造骨細(xì)胞（osteoblast）亦稱成骨細(xì)胞。是參與骨組織形成的細(xì)胞。顱骨位于脊柱上方，由23塊形狀和大小不同的扁骨和不規(guī)則骨組成。除下頜骨及舌骨外，其余各骨彼此借縫或軟骨牢固連結(jié)，起著保護(hù)和支持腦、感覺器官以及消化器和呼吸器的起始部分的作用。顱分腦顱和面顱兩部分。腦顱位于顱的后上部，內(nèi)有顱腔，容納腦，共8塊。面顱為顱的前下部分，包含眶、鼻腔、口腔等結(jié)構(gòu)，構(gòu)成面部的支架，共15塊。成骨細(xì)胞是骨形成的主要功能細(xì)胞，負(fù)責(zé)骨基質(zhì)的合成、分泌和礦化。骨不斷地進(jìn)行著重建，骨重建過程包括破骨細(xì)胞貼附在舊骨區(qū)域，分泌酸性物質(zhì)溶解礦物質(zhì)，分泌蛋白酶消化骨基質(zhì)，形成骨吸收陷窩；其后，成骨細(xì)胞移行至被吸收部位，分泌骨基質(zhì)，骨基質(zhì)礦化而形成新骨；破骨與成骨過程的平衡是維持正常骨量的關(guān)鍵。成骨細(xì)胞培養(yǎng)不僅有助于了解骨形成機(jī)制、骨骼系統(tǒng)疾病的分子和細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)，也是藥物篩選、生物材料開發(fā)和生物工程研究的重要手段。
方法簡(jiǎn)介：
實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠顱蓋造骨采用膠原酶消化法制備而來制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)：
實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠顱蓋造骨經(jīng)ALP染色檢測(cè)，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | |
組織來源 | 顱骨 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X8241 |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 梭形、多角形 |
培養(yǎng)信息：
包被條件：
培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：梭形、多角形
傳代特性：可傳3代左右
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
大鼠顱蓋造骨體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞復(fù)蘇步驟:
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
公司正在出售的產(chǎn)品：
大鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白4(IGFBP4)試劑盒 ，英文名： IGFBP4 ELISA Kit
Mouse endothelial lipase (EL) ELISA Kit 小鼠內(nèi)皮脂肪酶(EL)試劑盒
MouseVascuolarcelladhesionmolecule1,VCAM-1ELISAkit 小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforHumanCyclin-D1ELISAKit人細(xì)胞周期素D1
細(xì)胞AURORA-C激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次
ELISAKitBMPs大鼠骨形成蛋白
脫脂奶粉 100g
Skimmilk 500g
超氧化物歧化酶 30KU
SOD 3KU
磷酯酶Cγ1抗體
小鼠(CH)Elisa 試劑盒 96T/48T
Human placea growth factor (PLGF) ELISA Kit 人胎盤生長(zhǎng)因子(PLGF)試劑盒
Humanplasmin-aiplasmincomplex,PAPELISAKit 人纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物(PAP)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
HumanBcellactivationfactorrfromthetumornecrosisfactorfamilyreceptor,BAFF-R試劑盒人B細(xì)胞活化因子受體(BAFF-R)試劑盒規(guī)格：96T/48T
植物源性飼料油菜(canola)試劑盒20次
Humahrombieceptor,ELISAKit人受體()試劑盒規(guī)格：96T/48T
運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活蛋白結(jié)合蛋白1抗體
ACP5重組人 ACP5 / TRAP 蛋白 Protein
序列相似家族5成員C(FAM5C)重組蛋白 Recombinant Family With Sequence Similarity 5, Member C (FAM5C)
HA重組甲型流感 H5N1 (A/VietNam/1203/2004) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein
FGFR2 Protein Human 重組人 FGFR2 / CD332 蛋白
Spike Protein MERS-CoV 中東呼吸綜合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein (ECD, aa 1-1297, His 標(biāo)簽)
大鼠顱蓋造骨細(xì)胞序列相似家族5成員C(FAM5C)重組蛋白 Recombinant Family With Sequence Similarity 5, Member C (FAM5C)
FGFR2 Protein Human 重組人 FGFR2 / CD332 蛋白
ACP5重組人 ACP5 / TRAP 蛋白 Protein
Spike Protein MERS-CoV 中東呼吸綜合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein (ECD, aa 1-1297, His 標(biāo)簽)
HA重組甲型流感 H5N1 (A/VietNam/1203/2004) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein
細(xì)胞凍存步驟:
待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；
1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
