細(xì)胞傳代步驟：
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
大鼠肺微血管平滑肌分離自肺組織；肺是機(jī)體的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆蓋于心之上。肺有分葉，左二右三，共五葉。肺經(jīng)肺系（指氣管、支氣管等）與喉、鼻相連，故稱喉為肺之門(mén)戶，鼻為肺之外竅。肺血管平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見(jiàn)細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng)，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn)。肺血管平滑肌細(xì)胞主要功能：①細(xì)胞表面表達(dá)介質(zhì)（ICAM-1和VCAM-1）參與血管壁炎癥反應(yīng)；②是多數(shù)重要?jiǎng)用}疾病的靶細(xì)胞。肺血管平滑肌細(xì)胞與主要病生理變化：①平滑肌增生易致肺動(dòng)脈高壓；②先天性肺動(dòng)脈狹窄；③肺動(dòng)脈栓塞。血管平滑肌細(xì)胞的加速生長(zhǎng)潛能是血管疾病進(jìn)展的關(guān)鍵因素，新研究表明血管平滑肌細(xì)胞表達(dá)的ICAM-1和VCAM-1能促進(jìn)血管壁的炎癥反應(yīng)，并且與血管疾病的發(fā)展及穩(wěn)定性有關(guān)。
方法簡(jiǎn)介：
實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠肺微血管平滑肌采用混合膠原酶消化法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)：
實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠肺微血管平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | |
組織來(lái)源 | 肺 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X8225 |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 |
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
傳代特性：可傳2-3代左右
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
大鼠肺微血管平滑肌體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞復(fù)蘇步驟:
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
公司正在出售的產(chǎn)品：
大鼠糖原0酸化酶M(PYGM)試劑盒 ，英文名： PYGM ELISA Kit
Mouse placea growth factor (PLGF) ELISA Kit 小鼠胎盤(pán)生長(zhǎng)因子(PLGF)試劑盒
Rat17-Hydroxyprogesterone,17-OHPELISAKit 大鼠17羥孕酮(17-OHP)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforH-4(umanNeuroophin4)ELISAKIT人神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子4
細(xì)胞PKCδ激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次
ELISAKi-proBNP大鼠N端前腦素
小鼠角化細(xì)胞內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)ELISAKit ELISA. 96T/48T
小鼠活化素A(ACV-A)ELISAKit ELISA. 96T/48T
小鼠腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)ELISAKit ELISA. 96T/48T
小鼠骨成型蛋白2(BMP-2)ELISAKit ELISA. 96T/48T
嗅覺(jué)受體家族5亞基3抗體
小鼠0酸肌醇3激酶(PI3K)ELISA 試劑盒 試劑盒 組裝/原裝
Rat desmin (Des) ELISA Kit 大鼠結(jié)蛋白(Des)試劑盒
Humancardiacisoformofopni,cELISAKit 人心肌特異性肌鈣蛋白T(c)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humanadenosinedeaminase,ADA試劑盒人腺苷脫氨酶(ADA)試劑盒規(guī)格：96T/48T
直腸標(biāo)記K-ras糞便檢測(cè)突變熒光分析試劑盒50次
Mousealpha-granularmembraneprotein,GMP-140ELISAKit小鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)試劑盒規(guī)格：96T/48T
N-α-乙酰轉(zhuǎn)移酶40抗體
FCGR2B重組食蟹猴 CD32b / FCGR2B 蛋白 Protein
MT-II(Melanotan II Acetate 1gMT-II(Melanotan II Acetate) 醋酸美拉諾坦II
IL9重組人 IL-9 / Interleukin-9 蛋白 Protein
CYGB Protein Human 重組人 Cytoglobin / CYGB 蛋白
AKT3 Protein Mouse 重組小鼠 AKT3 蛋白 (aa 106-479, His & GST 標(biāo)簽)
大鼠肺微血管平滑肌細(xì)胞MT-II(Melanotan II Acetate 1gMT-II(Melanotan II Acetate) 醋酸美拉諾坦II
CYGB Protein Human 重組人 Cytoglobin / CYGB 蛋白
FCGR2B重組食蟹猴 CD32b / FCGR2B 蛋白 Protein
AKT3 Protein Mouse 重組小鼠 AKT3 蛋白 (aa 106-479, His & GST 標(biāo)簽)
IL9重組人 IL-9 / Interleukin-9 蛋白 Protein
細(xì)胞凍存步驟:
待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；
1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
