cDNA *鏈合成試劑盒50 次實(shí)驗(yàn)方法合成建文庫(kù)用的 1st-strand cDNA:
1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長(zhǎng)度成反比。 RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對(duì)富含二級(jí)結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然 后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
cDNA *鏈合成試劑盒50 次實(shí)驗(yàn)方法按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對(duì)照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標(biāo)記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測(cè)。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機(jī)引物，將出現(xiàn)多個(gè)小片段）。
產(chǎn)品介紹：
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長(zhǎng) cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長(zhǎng)可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提 供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫(kù)構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。
〖重金屬〗(以Pb計(jì))：≤0.0005%
甲烷溶解試驗(yàn)：合格
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：藍(lán)色結(jié)晶性粉末。易被空氣氧化，可加入二氧化硫水溶液保護(hù)。易溶于四錄化碳和氯方，其溶液不穩(wěn)定，微溶于乙醇，不溶于水?！既埸c(diǎn)〗 168℃(分解)。
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)〖鉛〗的靈敏試劑，并用作測(cè)定鈷、銅、汞、〖鋅〗和銀等。絡(luò)合指示劑
〖保存〗：RT，避光
姜黃素
〖英文名稱〗：Curcumin；1,7-Bis(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-1,6-heptadiene-3,5-dione；C.I. 75300；C.I. Natural Yellow 3；Diferuloylmethane
〖其他名稱〗：克扣明；1,7-雙(4-羥基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮；天然黃3；二阿魏酸甲烷；（E,E）-1，7-雙（4-羥基-3-甲氧基苯基）-1，6-庚二烯-3，5-二酮姜黃素；姜黃色素；川芎內(nèi)酯B
〖CAS號(hào)〗：458-37-7
C21H20O6=368.38
〖級(jí)別〗：AR
〖含量〗：≥95.0%
〖熔點(diǎn)〗：182～185℃（2℃間距）
靈敏度試驗(yàn)：合格
乙醇溶解試驗(yàn)：合格
柱式細(xì)菌 RNAout 單細(xì)胞裂解液 (DNA)
一站式柱式 miRNAout 單細(xì)胞裂解液 (RNA)
一步法無內(nèi)毒素質(zhì)粒 DNAout 單細(xì)胞懸浮液
柱式 DNA PAGE 膠回收試劑盒 胚胎裂解液
柱式 miRNA PAGE 膠回收試劑盒 顯影定影套裝
柱式 RNA 純化試劑盒 顯影粉
DMSO，PCR 定影粉
兩管式 RT-PCR 試劑盒 (MMLV-Taq) 熒光尺
柱式 OLIGO 回收試劑盒 凋亡 DNAout
RNA Tris Base( 三羥甲基氨基甲烷 ) DNA 磷酸化試劑盒
RNase-free 水 Taq 酶抗體
RNase-free 水 Taq 酶抗體
非凍型細(xì)菌 RNA 保存液 Real-Time PCR 稀釋液
非凍型細(xì)菌 RNA 保存液
