一管式雙鏈 cDNA 合成試劑盒10 次原理合成建文庫用的 1st-strand cDNA:
1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對(duì)富含二級(jí)結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然 后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
一管式雙鏈 cDNA 合成試劑盒10 次原理按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對(duì)照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標(biāo)記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機(jī)引物，將出現(xiàn)多個(gè)小片段）。
產(chǎn)品介紹：
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提 供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。
〖保存〗：RT
〖鋅〗試劑
〖英文名稱〗：Zincon；2-Carboxy-2′-hydroxy-5′-sulfoformazylbenzene；1-(2′-Hydroxy-5′-sulfophenyl)-3-phenyl-5-(2″-carboxyphenyl)formazan；5-(o-Carboxyphenyl)-1-(2-hydroxy-5-sulfophenyl)-3-phenyl formazan
〖其他名稱〗： 5-(2-羧基苯基)-1-(2-羥基-5-磺基苯基)-3-苯基甲單鈉鹽；2-羧基-2′-氫基-5′-磺苯甲酸單鈉鹽；鄰[2-（2-羥基-5-磺基苯偶氮）亞芐基]肼基苯甲酸單鈉鹽；〖鋅〗單鈉鹽
〖CAS號(hào)〗：62625-22-3或56484-13-0
C20H15N4NaO6S=462.41
〖級(jí)別〗：AR
對(duì)〖鋅〗靈敏度試驗(yàn)：合格
堿溶解試驗(yàn)：合格
絡(luò)合試驗(yàn)：合格
〖灼燒殘?jiān)?以〖硫酸鹽〗計(jì))：≤20.0%
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：紫棕色結(jié)晶性粉末。溶于乙醇和堿，溶于氫氧呈紅色，不溶于水。遇〖鋅〗生成藍(lán)色化合物，稀時(shí)為溶液，濃時(shí)為深藍(lán)色沉淀。
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)比色法測定〖鋅〗和銅。直接測定〖鋅〗的絡(luò)合指示劑，并可測定銅和汞。作為絡(luò)合指示劑間接滴定鈣、〖鋅〗、銅、〖鎳〗、鈷、〖鐵〗、錳、鎘、〖鉛〗、鈰和銦
〖保存〗：RT
磷鎢酸
〖英文名稱〗：Phosphotungstic acid hydrate；Tungstophosphoric acid hydrate；Dodecatungstophosphoric acid hydrate
石蠟包埋組織 DNAout 抗干擾 Taq DNA 聚合酶
DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (50-500 bp) AMV cDNA *鏈合成試劑盒
DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (100-600 bp) 一步式 RT-PCR Mix
DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) 200-1500 bp) Bst DNA 聚合酶，全長
DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (100-200 bp) 9° Nm DNA 聚合酶
DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (200-5000 bp) Therminator DNA 聚合酶
DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (250-1500 bp) Bsu DNA 聚合酶，大片段
DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (100-1500 bp) Therminator γ DNA 聚合酶
DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (100-5000 bp) T7 DNA 聚合酶 ( 未修飾 )
DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (300-10000 bp) Poly(U) 聚合酶
糞便 DNAout Taq DNA 連接酶
糞便 DNAout T4 RNA 連接酶 1
分子量標(biāo)準(zhǔn) (
