隨機引物法 DNA 探針*標記試劑盒5次實驗方法使用方法:
一、交換反應(yīng) 1. 實驗前需自備的試劑:7 M 醋酸銨、*乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液: 成分 加入的體積 自備的 5’磷酸化 DNA 片段 14 μL(≤5 pmoles 的 5′末端) 5×交換反應(yīng)緩沖液 5 μL [γ -32P] ATP 5 μL T4 多聚核苷酸激酶(10 U/μL) 1 μL 滅菌的超純水 補足到 25 μL 注:5 pmoles 的 5’末端約等于 0.17 μg 的長 100 bp 的雙鏈 DNA。
3. 37℃反應(yīng) 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5~10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4(pH 4.5)。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀時使其終濃度達 300 mM。
6. 加入 87.5 μL(2.5 倍)的冷無水乙醇,-20℃放置 30~60 分鐘。
7. 離心回收沉淀,用 70%的冷乙醇清洗沉淀,真空干燥。 8. 用適當 Buffer 溶解沉淀。 注:通過第 5~8 步操作幾乎可以除去大部分未反應(yīng)的[γ-32P] ATP,如要 *將其除去時,乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白質(zhì)時,請在第
8 步之后進行。
隨機引物法 DNA 探針*標記試劑盒5次實驗方法產(chǎn)品介紹:
磷酸化反應(yīng)標記:
A. 去磷酸化反應(yīng)
1. 實驗前需自備的試劑:TE 飽和酚/、3 M NaCl 、*乙醇、70% 乙醇、牛小腸堿性磷酸酶(CIAP)等 2. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液: 成分 加入的體積 自備的 DNA 片段 133 μL(≤10 μg) 1 M Tris-HCl,pH 8.0 15 μL 牛小腸堿性磷酸酶 (CIAP,10~20 U/μL)
2 μL 滅菌的超純水 補足到 150 μL
3. 50℃反應(yīng) 30 分鐘。
4. 加入 150 μL 的 TE 飽和酚//(25:24:1),充分混勻。
5. 離心,取上層(水層)移到另一個微量離心管中。
6. 重復(fù)操作 4~5。
7. 加入 7.5 μL 的 3 M NaCl(zui終濃度 150 mM)。
8. 加入 375 μL(2.5 倍量)的冷無水乙醇,-20℃放置 30~60 分鐘。
9. 離心回收沉淀,用 1 mL 70%的冷乙醇清洗后,沉淀真空干燥。 10. 使用 20 μL 的 TE Buffer 溶解沉淀。
磷酸化反應(yīng)(前反應(yīng)):
1. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液:
2. 37℃反應(yīng) 30 分鐘。
3. 下面的操作與交換反應(yīng)的第 4-8 步操作相同。
合成 DNA 寡核苷酸的標記:
當摻入水平很低的時候,需要使用本步驟,即通過體積排阻色譜或過濾試 劑盒除去未反應(yīng)的標記。Sephadex G-50 層析柱(需另購)對于去除未摻入 的 dNTPs 效果很好,它還能大幅減少小于 20 個堿基的 DNA 寡核苷酸和小于 20 bp 的雙鏈 DNA 的量。使用之前需要在 70℃加熱 5~10 分鐘以使 T4 多 聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 層析柱可以用來純化長度不小于 10 個 堿基的寡核苷酸。
〖級別〗:BR
〖含量〗Dye content:~70%
〖熔點〗:140~143℃
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:綠色或黑色粉末,溶于水
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗
〖保存〗:RT
魯米諾
〖英文名稱〗:Luminol;3-Aminophthalhydrazide, 5-Amino-2,3-dihydro-1,4-phthalazinedione
〖其他名稱〗:3-氨基鄰苯二甲酰肼;發(fā)光氨;3-氨基苯二甲酰縮肼;冷光劑;3-氨基苯二甲酰肼;5-氨基-2,3-二氫-1,4-二氮雜萘二酮;3-氨基鄰苯二甲酸酐
〖CAS號〗:521-31-3
C8H7N3O2=177.16
〖級別〗:BR
〖含量〗Dye content:≥98.0%
RV沙門菌*250g用于藥品或生物制品中沙門菌選擇性增菌
堿性蛋白胨水(APW) 250(g) incubation media 堿性蛋白胨水(APW) 250(g)
ONPG發(fā)酵管 ONPG發(fā)酵管 20支 BR
MH瓊脂(MHA)250用于抗生素敏感試驗incubationmediaMH瓊脂(MHA)250用于抗生素敏感試驗
PeptoneBacteriological
RVSalmonellaEnrichmentMedium
3%鈉堿性蛋白胨水(APW) 250(g) incubation media 3%鈉堿性蛋白胨水(APW) 250(g)
肝素抗凝管 肝素抗凝管 5毫升
中國藍瓊脂250弱選擇性培養(yǎng)基,用于腸道致病菌的選擇性分離incubationmedia中國藍瓊脂250弱選擇性培養(yǎng)基,用于腸道致病菌的選擇性分離
布氏肉湯添加劑 2ml*5 每支加入225ml布氏肉湯中
無菌檢查培養(yǎng)基
TCBS瓊脂 250(g) incubation media TCBS瓊脂 250(g)
Rambach瓊脂 Rambach瓊脂 250克 *快速顯色分離培養(yǎng)
克氏雙糖鐵瓊脂250用于細菌復(fù)合生化試驗(葡萄糖,乳糖)incubationmedia克氏雙糖鐵瓊脂250用于細菌復(fù)合生化試驗(葡萄糖,乳糖)
BrucellaBrothAdditive
硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基250g用于藥品,生物制品無菌試驗,培養(yǎng)基,厭氧菌
TCBS瓊脂 1000(g) incubation media TCBS瓊脂 1000(g)
耶爾森氏菌顯色培養(yǎng)基 耶爾森氏菌顯色培養(yǎng)基 250克 耶爾森氏菌快速顯色分離培養(yǎng)
血瓊脂基礎(chǔ)2號250供分離營養(yǎng)要求非常高的致病菌用,后加血液制成血平板incubationmedia血瓊脂基礎(chǔ)2號250供分離營養(yǎng)要求非常高的致病菌用,后加血液制成血平板
蠟樣芽孢桿菌檢驗培養(yǎng)基
改良馬丁培養(yǎng)基250g用于藥品及生物制品霉菌無菌檢驗
鈉*肉湯基礎(chǔ)(SCPB) 250(g) incubation media 鈉*肉湯基礎(chǔ)(SCPB) 250(g)
乳酸菌檢測計數(shù)顯色培養(yǎng)基 乳酸菌檢測計數(shù)顯色培養(yǎng)基 250克 乳酸菌快速顯色分離培養(yǎng)
血液瓊脂基礎(chǔ)250供分離營養(yǎng)要求較高的致病菌用,后加血液制成血平板incubationmedia血液瓊脂基礎(chǔ)250供分離營養(yǎng)要求較高的致病菌用,后加血液制成血平板
改良V-P培養(yǎng)基 250g 用于蠟樣芽孢桿菌的V-P試驗
AHM鑒別用培養(yǎng)基