Fluorescein-12-dUTP 溶液,1mM25μL實驗方法磷酸化反應(yīng)(前反應(yīng)):
1. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液:
2. 37℃反應(yīng) 30 分鐘。
3. 下面的操作與交換反應(yīng)的第 4-8 步操作相同。
合成 DNA 寡核苷酸的標記:
當摻入水平很低的時候,需要使用本步驟,即通過體積排阻色譜或過濾試 劑盒除去未反應(yīng)的標記。Sephadex G-50 層析柱(需另購)對于去除未摻入 的 dNTPs 效果很好,它還能大幅減少小于 20 個堿基的 DNA 寡核苷酸和小于 20 bp 的雙鏈 DNA 的量。使用之前需要在 70℃加熱 5~10 分鐘以使 T4 多 聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 層析柱可以用來純化長度不小于 10 個 堿基的寡核苷酸。
Fluorescein-12-dUTP 溶液,1mM25μL實驗方法使用方法:
一、交換反應(yīng) 1. 實驗前需自備的試劑:7 M 醋酸銨、*乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液: 成分 加入的體積 自備的 5’磷酸化 DNA 片段 14 μL(≤5 pmoles 的 5′末端) 5×交換反應(yīng)緩沖液 5 μL [γ -32P] ATP 5 μL T4 多聚核苷酸激酶(10 U/μL) 1 μL 滅菌的超純水 補足到 25 μL 注:5 pmoles 的 5’末端約等于 0.17 μg 的長 100 bp 的雙鏈 DNA。
3. 37℃反應(yīng) 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5~10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4(pH 4.5)。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀時使其終濃度達 300 mM。
6. 加入 87.5 μL(2.5 倍)的冷無水乙醇,-20℃放置 30~60 分鐘。
7. 離心回收沉淀,用 70%的冷乙醇清洗沉淀,真空干燥。 8. 用適當 Buffer 溶解沉淀。 注:通過第 5~8 步操作幾乎可以除去大部分未反應(yīng)的[γ-32P] ATP,如要 *將其除去時,乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白質(zhì)時,請在第
8 步之后進行。
Fluorescein-12-dUTP 溶液,1mM25μL實驗方法產(chǎn)品介紹:
Fluorescein-12-dUTP 溶液,1mM25μL實驗方法磷酸化反應(yīng)標記:
A. 去磷酸化反應(yīng)
1. 實驗前需自備的試劑:TE 飽和酚/、3 M NaCl 、*乙醇、70% 乙醇、牛小腸堿性磷酸酶(CIAP)等 2. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液: 成分 加入的體積 自備的 DNA 片段 133 μL(≤10 μg) 1 M Tris-HCl,pH 8.0 15 μL 牛小腸堿性磷酸酶 (CIAP,10~20 U/μL)
2 μL 滅菌的超純水 補足到 150 μL
3. 50℃反應(yīng) 30 分鐘。
4. 加入 150 μL 的 TE 飽和酚//(25:24:1),充分混勻。
5. 離心,取上層(水層)移到另一個微量離心管中。
6. 重復(fù)操作 4~5。
7. 加入 7.5 μL 的 3 M NaCl(zui終濃度 150 mM)。
8. 加入 375 μL(2.5 倍量)的冷無水乙醇,-20℃放置 30~60 分鐘。
9. 離心回收沉淀,用 1 mL 70%的冷乙醇清洗后,沉淀真空干燥。 10. 使用 20 μL 的 TE Buffer 溶解沉淀。
*麥芽提取物瓊脂培養(yǎng)基250g用于真菌的分離培養(yǎng)
TPY瓊脂培養(yǎng)基 250(g) incubation media TPY瓊脂培養(yǎng)基 250(g)
DME培養(yǎng)基 DMEM 10升 高糖,含丙酮酸鈉和*
牛津瓊脂(OXA)基礎(chǔ)250用于單增李氏菌的選擇性分離incubationmedia牛津瓊脂(OXA)基礎(chǔ)250用于單增李氏菌的選擇性分離
菌種芽孢培養(yǎng)基 250g 用于嗜熱脂肪芽孢桿菌芽孢培養(yǎng)
察氏液體培養(yǎng)基250g用于測定真菌孢子發(fā)芽率
嗜冷菌計數(shù)瓊脂 250(g) incubation media 嗜冷菌計數(shù)瓊脂 250(g)
M9肉湯 M9 Broth 250克 BR
*2mg/支*5添于HB4incubationmedia*2mg/支*5添于HB4171中
BacillusBacteriaMedium
無機鹽培養(yǎng)基250g用于紡織品防霉性能測試
緩沖蛋白胨水(BPW) 250(g) incubation media 緩沖蛋白胨水(BPW) 250(g)
M9CA肉湯 M9CA Broth 250克 BR
溴甲酚紫葡萄糖肉湯250用于低酸性罐頭食品商業(yè)無菌檢驗incubationmedia溴甲酚紫葡萄糖肉湯250用于低酸性罐頭食品商業(yè)無菌檢驗
細菌保存培養(yǎng)基 250g 用于嗜熱脂肪芽孢桿菌菌種保存
InorganicSaltMedium
緩沖蛋白胨水(BPW) 1000(g) incubation media 緩沖蛋白胨水(BPW) 1000(g)
M63肉湯 M63 Broth 250克 BR
酸性肉湯250用于酸性罐頭食品商業(yè)無菌檢驗incubationmedia酸性肉湯250用于酸性罐頭食品商業(yè)無菌檢驗
BacterialStorageMedium
馬鈴薯液體培養(yǎng)基(含*)250g用于霉菌和酵母菌增菌培養(yǎng)
膽硫乳瓊脂(DHL) 250(g) incubation media 膽硫乳瓊脂(DHL) 250(g)
F-12營養(yǎng)混合物 F-12 Nutrient Mixture 10升 含L-*,不含NaHCO3
麥芽浸膏湯200用于酸性罐頭食品商業(yè)無菌檢驗incubationmedia麥芽浸膏湯200用于酸性罐頭食品商業(yè)無菌檢驗
肝肉瓊脂培養(yǎng)基 250g 用于亞鹽還原厭氧孢子的計數(shù)
Potatoliquidmedium
膽硫乳瓊脂(DHL) 1000(g) incubation media 膽硫乳瓊脂(DHL) 1000(g)
DMEM/F12培養(yǎng)基 F-12(DMEM) 10升 BR
錳鹽營養(yǎng)瓊脂250用于嗜熱需氧芽孢桿菌的檢驗incubationmedia錳鹽營養(yǎng)瓊脂250用于嗜熱需氧芽孢桿菌的檢驗
溴甲酚紫葡萄糖瓊脂 250g 用于嗜熱需氧芽孢桿菌計數(shù)
改良察氏液體培養(yǎng)基250g用于霉菌的增菌培養(yǎng)
三糖鐵瓊脂(TSI) 250(g) incubation media 三糖鐵瓊脂(TSI) 250(g)
M199培養(yǎng)基 M199 Medium 10升 細胞培養(yǎng)用
皰肉培養(yǎng)基基礎(chǔ)250加入牛肉粒,用于肉毒梭菌及厭氧梭狀芽孢桿菌的檢驗incubationmedia皰肉培養(yǎng)基基礎(chǔ)250加入牛肉粒,用于肉毒梭菌及厭氧梭狀芽孢桿菌的檢驗
BromcresolPurpleDextroseAgar
Fluorescein-12-dUTP 溶液,1mM25μL實驗方法C12H10NNaO3S=271.27
〖級別〗:IND
對硝酸鹽靈敏度:合格
對氧化劑靈敏度:合格
水中溶解試驗:合格
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:白色或淺黃色結(jié)晶性粉末。對濕敏感。溶于水和熱乙醇。zui大吸收波長290~295nm(水中)。有刺激性
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)氧化還原指示劑
〖保存〗:RT,避光
滂胺天藍
〖英文名稱〗:Pontamine sky blue 6BX;Direct blueⅠ;Chicago sky blue 6B;Chicago blue 6B;Bright greenish blue;C.I. 24410
〖其他名稱〗:芝加哥天藍6B;直接湖藍6B;直接藍1;聯(lián)苯胺藍FB;胺天藍
〖CAS號〗:2610-05-1
C34H24N6Na4O16S4=992.80
〖級別〗:chroma
aniline)