細胞傳代步驟：
如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細胞簡介：
小鼠小氣道上皮分離自小氣道；臨床上通常將內(nèi)徑小于2mm的小細支氣管稱為小氣道。小氣道具有氣流阻力小，但易阻塞的特點。在平靜吸氣時，空氣進入狹窄的鼻咽部，產(chǎn)生渦流。由于小氣道已無軟骨支持，在脫離纖維鞘嵌入肺組織后，管腔通暢性不象軟骨性氣道，易于受胸腔的壓力變化的影響。小氣道上皮細胞形成連續(xù)呼吸道內(nèi)層，作為隔絕外界有害物質(zhì)的物理和功能屏障發(fā)揮著的作用。小氣道位于肺泡和氣管的交界處，這些細胞在功能上能夠調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)、產(chǎn)生化學(xué)因子進行宿主防御、表達粘附分子，并可能通過HLA-DR表達呈遞抗原；它們還能產(chǎn)生液體有助于肺液的平衡。許多呼吸道疾病，如哮喘、支氣管炎、慢性阻塞性肺病和囊性纖維化，都涉及呼吸道表面上皮細胞的破壞；小氣道上皮細胞的培養(yǎng)可為防止呼吸道擴增疾病和重塑提供新的治療選擇。小氣道的生理功能特點：①小氣道阻力??；②氣流速度慢；③可調(diào)節(jié)控制通氣與血流比例。
方法簡介：
實驗室分離的小鼠小氣道上皮采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
實驗室分離的小鼠小氣道上皮經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | |
組織來源 | 小氣道 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X8538 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 上皮細胞樣 |
培養(yǎng)信息：
包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
傳代特性：可傳1-2代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
小鼠小氣道上皮體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞復(fù)蘇步驟:
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
公司正在出售的產(chǎn)品：
大鼠乳過氧化物酶(LPO)試劑盒 ，英文名： LPO ELISA Kit
Mouse angiotensin II (ANG- II) ELISA Kit 小鼠血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)試劑盒
RatInhibin,INH-AELISAKit 大鼠抑制素A(INH-A)pcr檢測試劑盒分裝
CLIAKitforGzms-BELISAKit大鼠顆粒酶B
細胞型肝病毒蛋白酶(HCVPROTEASE)活性熒光淬滅法定量試劑盒20次
Raturokinase,UKELISAKit大鼠(UK)試劑盒規(guī)格：96T/48T
兔內(nèi)皮型合成酶(eNOS)ELISAKit ELISA
兔型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)ELISAKit ELISA
兔型纖溶酶原激活物(uPA)ELISAKit ELISA
兔超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)ELISAKit ELISA
端粒結(jié)合蛋白2抗體
AF647標(biāo)記的網(wǎng)格蛋白重鏈抗體
CD5L重組小鼠 CD5L / CD5 antigen-like 蛋白 Protein
Claudin-11 peptide 少突膠質(zhì)細胞跨膜蛋白抗原 0.5mgClaudin-11 peptide 少突膠質(zhì)細胞跨膜蛋白抗原
RELA重組人 RELA / Transcription factor p65 / NFkB p65 蛋白 (aa 1-306, GST 標(biāo)簽) Protein
HIST3H2A Protein Human 重組人 HIST3H2A / Histone H2A 蛋白
VCAM1 Protein Mouse 重組小鼠 VCAM1 / CD106 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)
Claudin-11 peptide 少突膠質(zhì)細胞跨膜蛋白抗原 0.5mgClaudin-11 peptide 少突膠質(zhì)細胞跨膜蛋白抗原
HIST3H2A Protein Human 重組人 HIST3H2A / Histone H2A 蛋白
CD5L重組小鼠 CD5L / CD5 antigen-like 蛋白 Protein
VCAM1 Protein Mouse 重組小鼠 VCAM1 / CD106 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)
RELA重組人 RELA / Transcription factor p65 / NFkB p65 蛋白 (aa 1-306, GST 標(biāo)簽) Protein
小鼠小氣道上皮細胞小鼠N端前腦素(-proBNP)ELISA pcr檢測試劑盒
Rat homocysteic acid (Hcy) ELISA Kit 大鼠同型半胱(Hcy)試劑盒
HumanEsadiol,E2ELISAKit 人雌二醇(E2)pcr檢測試劑盒分裝
humancolicin試劑盒人大腸菌素(colicin)試劑盒規(guī)格：96T/48T
組織3-羥-3-甲戊二酰(HMG-COA)合成酶活性比色法定量試劑盒20次
HumaegeneratinggeneⅣ,REG-4ELISAKit人再生基因蛋白IV(REG-4)試劑盒規(guī)格：96T/48T
細胞凍存步驟:
待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例；
1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取
