細(xì)胞傳代步驟：
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細(xì)胞簡介：
小鼠肺大靜脈平滑肌分離自肺大靜脈組織；肺大靜脈在用肺呼吸的脊椎動(dòng)物中，把動(dòng)脈血由肺送回心臟的靜脈，是一個(gè)靜脈里流動(dòng)脈血的血管。左右1對，共4條，兩條連接右肺，兩條連接左肺。肺靜脈異位引流是指肺靜脈未能直接與左心房連接，而與右心房或體靜脈系統(tǒng)連接的先天性心血管異位。肺靜脈淤血性肺動(dòng)脈高壓，是由于肺靜脈內(nèi)血液淤滯而引起的肺動(dòng)脈高壓。正常情況下，肺循環(huán)具有血壓低、阻力小和順應(yīng)性大的特點(diǎn)，肺動(dòng)脈壓力高低取決于單位時(shí)間內(nèi)肺動(dòng)脈血流量和肺血管的阻力，要維持肺循環(huán)的低壓、低阻的狀態(tài)，必須保證整個(gè)肺循環(huán)系統(tǒng)的暢通無阻，血液順利地由肺動(dòng)脈經(jīng)毛細(xì)血管進(jìn)入肺靜脈，再入左心室，經(jīng)過左心室收縮進(jìn)入體循環(huán)，才能避免肺動(dòng)脈內(nèi)壓力升高。肺大靜脈平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點(diǎn)。該細(xì)胞參與血管壁炎癥反應(yīng)，保持靜脈管腔的通暢，還是多數(shù)動(dòng)脈疾病的靶細(xì)胞。
方法簡介：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠肺大靜脈平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠肺大靜脈平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | |
組織來源 | 肺靜脈組織 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X7041 |
生長特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 |
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳3代左右
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞復(fù)蘇步驟:
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
公司正在出售的產(chǎn)品：
大鼠白介素7受體(IL-7R)試劑盒 ，英文名： IL-7R ELISA Kit
Mouse ierleukin 16 (IL-16) ELISA Kit 小鼠白介素16(IL-16)試劑盒
ELISA 小鼠心肌轉(zhuǎn)錄因子3(mouse GATA3) 進(jìn)口分裝
CLIAKitforIP-10/CXCL10(Humanierferon-inducibleprotein10)ELISAKit人干擾素誘導(dǎo)蛋白10
通用型福氏志賀氏菌(Shigellaflexneri)試劑盒20次
ELISAKitLp-α大鼠脂蛋白α
小鼠白介素5(IL-5)試劑盒 96T/48T
小鼠白介素4(IL-4)試劑盒 96T/48T
小鼠白介素35（IL-35）試劑盒 96T/48T
小鼠白介素-33(IL-33)試劑盒 96T/48T
3號染色體開放閱讀框21抗體
小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶1(MMP-1)ELISA 試劑盒 96T/48T
Rat soluble tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand (sAIL) ELISA Kit 大鼠可溶性壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(sAIL)試劑盒
HumanSH2-coainingprotein,SHC/SLP-76ELISAKit 人SH2攜帶蛋白(SHC/SLP-76)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
HumanAi-keratinaibody,AKA試劑盒人抗角蛋白抗體(AKA)試劑盒規(guī)格：96T/48T
植物彌散吲哚-3-乙酸(IAA)比色法定量試劑盒(包括萃取)20次
HumanVascularEndothelialcellGrowthFactorB，VEGF-BELISAKit人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子B(VEGF-B)試劑盒規(guī)格：96T/48T
磷酸化內(nèi)質(zhì)網(wǎng)核信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白a1抗體
EFNB2重組大鼠 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白 Protein
GSK-3 Beta(NT 0.5mgGSK-3 Beta(NT) (Glycogen Synthase Kinase-3 Beta) 糖原合酶激酶-3β(抗原)
FES重組人 FES Kinase / Feline sarcoma oncogene 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein
EPHB4 Protein Human 重組人 EphB4 / HTK 蛋白 (aa 563-987, His & GST 標(biāo)簽)
CFD Protein Mouse 重組小鼠 Adipsin / Complement Factor D / CFD 蛋白
小鼠肺大靜脈平滑肌細(xì)胞GSK-3 Beta(NT 0.5mgGSK-3 Beta(NT) (Glycogen Synthase Kinase-3 Beta) 糖原合酶激酶-3β(抗原)
EPHB4 Protein Human 重組人 EphB4 / HTK 蛋白 (aa 563-987, His & GST 標(biāo)簽)
EFNB2重組大鼠 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白 Protein
CFD Protein Mouse 重組小鼠 Adipsin / Complement Factor D / CFD 蛋白
FES重組人 FES Kinase / Feline sarcoma oncogene 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein
細(xì)胞凍存步驟:
待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；
1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取
