谷草轉氨酶(GOT/AST)檢測試劑盒微量法說明書
注意：正式測定之前選擇2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
貨號: YX-W-A901
規(guī)格: 100T/48S
產(chǎn)品內容：
提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 3.5 mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：液體 3.5 mL×1 瓶，4℃保存；
試劑三：液體 30 mL×1 瓶，4℃保存；
標準品：液體 1mL×1 支，20μmol/mL 丙酮酸鈉標準品，4℃保存。
產(chǎn)品說明：
GOT（ 2.6.1.1）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，催化可逆轉氨基反應，是氨基酸代謝的重要酶。此外，GOT 在心肌細胞中含量最高，臨床上一般常作為心肌梗塞和心肌炎的輔助檢查。肝臟損害時其血清濃度也可升高。GOT 催化 α-酮戊二酸和天門冬氨酸發(fā)生轉氨基反應，生成谷氨酸和草酰乙酸，草酰乙酸進一步自行脫羧生成丙酮酸；丙酮酸可與 2,4-二硝基苯肼反應生成 2,4-二硝ji苯腙，在堿性條件下顯棕紅色；測定 505nm 吸光度的變化，即可計算 GOT 酶活力。
谷草轉氨酶(GOT/AST)檢測試劑盒試驗需自備的儀器和用品：
可見分光光計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣品測定的準備
1、 細胞或細菌樣品的制備 ：先收集細胞或細菌樣品到離心管內，棄上清，按照每 500 萬細胞或細菌加入 1mL 提取液，超聲波破碎細菌或細胞（功率 20％，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）。3500g，4℃離心 10min，取上清， 置冰上待測。
2、組織：稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進冰浴行勻漿。3500g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
3、血清（漿）樣品：直接檢測。
二、測定操作表
1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節(jié)波長至 505nm，蒸餾水調零。
2、首先將標準品稀釋至 2μmol/mL，按下表 混合標準品和試劑一得到相應濃度的標準管：
標準品（μL） | 試劑一（μL） | 標準管濃度（μmol/mL） |
22.5 | 7.5 | 1.5 |
15 | 15 | 1 |
12 | 18 | 0.8 |
6 | 24 | 0.4 |
3 | 27 | 0.2 |
1.5 | 28.5 | 0.1 |
0.75 | 29.25 | 0.05 |
0 | 30 | 0 |
3、在 EP 管或在 96 孔板中加入下列試劑
試劑名稱（μL） | 測定管 | 對照管 | 標準管 |
待測樣本 | 5 |
|
|
試劑一 | 25 | 25 |
|
標準液 |
|
| 30 |
混勻后，37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）預熱 30min | |||
試劑二 | 25 | 25 | 25 |
待測樣本 |
| 5 |
|
混勻后，37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）準確反應 20min | |||
試劑三 | 240 | 240 | 240 |
谷草轉氨酶(GOT/AST)檢測試劑盒混勻，室溫放置 10min，在 505nm 波長處測各管吸光度。注：0μmol/mL 標準管為空白管。
三、計算
1、標準曲線的繪制：
以各標準溶液濃度為 x 軸，以?A（A 標準管-A 空白管）為 y 軸做標準曲線，得到方程 y=kx+b。將（A 測定管-A 對照管）帶入方程求 x 值。
（1）2、GOT 活性計算：
按樣本鮮重計算：
單位定義：每小時每 g 鮮重樣品催化產(chǎn)生 1μmol 丙酮酸的量為一個 GOT 活力單位。
GOT（U/g 鮮重）=x×（V 樣本+V 試劑一）÷（W×V 樣本÷V 樣總）÷T=12x÷W。
（2） 按樣本蛋白濃度計算：
單位定義：每小時每 mg 組織蛋白催化產(chǎn)生 1μmol 丙酮酸的量為一個 GOT 活力單位。
GOT（U/mg prot）=x×（V 樣本+V 試劑一）÷（Cpr×V 樣本）÷T=12x÷Cpr。
（3） 按血清（漿）體積計算：
單位定義：每小時每 mL 血清樣品催化產(chǎn)生 1μmol 丙酮酸的量為一個 GOT 活力單位。
GOT（U/ mL）=x×（V 樣本+V 試劑一）÷V 樣本÷T=12x。
（4） 按細菌或細胞數(shù)量計算：
單位定義：每小時每 104 細菌或細胞催化產(chǎn)生 1μmol 丙酮酸的量為一個 GOT 活力單位。
GOT（U/104cell）=x×（V 樣本+V 試劑一）÷（500÷V 樣總×V 樣本）÷T=0.024x。
谷草轉氨酶(GOT/AST)檢測試劑盒V 樣本：吸取樣本體積，0.005mL；V 試劑一：吸取試劑一體積，0.025mL；V 樣總：吸取提取液體積，1mL；W：樣本鮮重，g；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；T：反應時間，0.5h；500：細胞數(shù)量，500 萬個
