冷凍保存細(xì)胞之方法:
小鼠抗天花粉蛋白雜交瘤;mAbTCSIgG-507說明書冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品描述:
細(xì)胞名稱 小鼠抗天花粉蛋白雜交瘤;mAbTCSIgG-507說明書
形態(tài)特性淋巴母細(xì)胞樣
生長特性半貼壁生長
特征特性
培養(yǎng)條件RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
傳代方法保持細(xì)胞密度在1×105~1×106cells/ml之間,每周換液2~3次
傳代情況
凍存條件基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測培養(yǎng)法(-)
STR-
同工酶
染色體
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)小鼠抗天花粉蛋白雜交瘤;mAbTCSIgG-507說明書準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
注意事項:
?1.一般客戶拿到小鼠抗天花粉蛋白雜交瘤;mAbTCSIgG-507說明書后,應(yīng)該注意什么?
客戶收到細(xì)胞先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議受收細(xì)胞時的培養(yǎng)基拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細(xì)胞100X,200X各一張),排除細(xì)胞本身污染的情況;收到細(xì)胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。
收到細(xì)胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度,如為貼壁細(xì)胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時,請按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
細(xì)胞出現(xiàn)問題,不予以重發(fā)的情況有哪些?
(1)客戶造成細(xì)胞污染,不重發(fā);
(2)客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
(3)非推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
(4)細(xì)胞狀態(tài)不好,未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā);
(5)細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的,不重發(fā);
(6)細(xì)胞收到2天內(nèi),未告知,不重發(fā);
(7)視具體情況而定。
CTSL1 Others Mouse 小鼠 CTSL / Cathepsin-L 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人上皮細(xì)胞總RNAHMEpiC NA
HCT-15 人結(jié)腸癌細(xì)胞
CL-0401NCI-H446(人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
MSC, 小鼠雪旺細(xì)胞
人類成纖維細(xì)胞系;CNLMG-B5537SKIN 人肝動脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
小鼠抗天花粉蛋白雜交瘤;mAbTCSIgG-507說明書*Anti-PCNA/FITC熒光素標(biāo)記增殖細(xì)胞核抗原抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-PCNA/FITC熒光素標(biāo)記增殖細(xì)胞核抗原抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-PCX/FITC熒光素標(biāo)記足細(xì)胞特異蛋白抗體規(guī)格:0.2ml
*Anti-PD-1/FITC熒光素標(biāo)記程序性死亡1抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*ANti-PDCD4/FITC熒光素標(biāo)記凋亡相關(guān)蛋白4抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-TFAR19/PDCD5/FITC熒光素標(biāo)記凋亡相關(guān)蛋白TFAR19抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-PDE4D/FITC熒光素標(biāo)記磷酸二酯酶4D抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-PDEF/FITC熒光素標(biāo)記上皮特異性ETs轉(zhuǎn)錄因子抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-PDGF-A/FITC熒光素標(biāo)記血小板源性生長因子-A抗體IgG規(guī)格:0.2ml
*Anti-PDGF-B/FITC熒光素標(biāo)記血小板源性生長因子-B抗體IgG規(guī)格:0.2ml
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