細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)抗人pirin單抗雜交瘤細(xì)胞;IIIA3bC1E12D1培養(yǎng)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
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產(chǎn)品描述:
細(xì)胞名稱 抗人pirin單抗雜交瘤細(xì)胞;IIIA3bC1E12D1培養(yǎng)
形態(tài)特性淋巴母細(xì)胞樣
生長特性半貼壁生長
特征特性可產(chǎn)生單克隆抗體。
培養(yǎng)條件RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
傳代方法1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況C30
凍存條件基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測陰性
STR
同工酶
染色體
注意事項(xiàng):
?1.一般客戶拿到抗人pirin單抗雜交瘤細(xì)胞;IIIA3bC1E12D1培養(yǎng)后,應(yīng)該注意什么?
客戶收到細(xì)胞先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議受收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細(xì)胞100X,200X各一張),排除細(xì)胞本身污染的情況;收到細(xì)胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。
收到細(xì)胞時(shí)如無異常情況,請?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度,如為貼壁細(xì)胞,未超過80%匯合度時(shí),將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時(shí),請按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
細(xì)胞出現(xiàn)問題,不予以重發(fā)的情況有哪些?
(1)客戶造成細(xì)胞污染,不重發(fā);
(2)客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
(3)非推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
(4)細(xì)胞狀態(tài)不好,未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā);
(5)細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理的,不重發(fā);
(6)細(xì)胞收到2天內(nèi),未告知,不重發(fā);
(7)視具體情況而定。
CM-R060大鼠腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
JAM3 Others Human 人 JAM3 / JAM-C 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
小鼠成骨細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
P388D1小鼠淋巴樣瘤細(xì)胞 P388D1 mouse lymphoid tumor cells RPMI-1640(GIBCO)+90%馬血清+10%FBS
IL12B Protein Human 重組人 IL12B / P40 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞 (HBMEC) ( 5×105 ) 大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 細(xì)胞名稱
抗人pirin單抗雜交瘤細(xì)胞;IIIA3bC1E12D1培養(yǎng)雞溶菌酶(LZM)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(iNOS)免疫試劑盒 Human inducible niic oxide syhase,iNOS ELISA KIT
可溶性壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(sAIL)ELISA試劑盒 ,英文名: sAIL ELISA Kit
Ratcross-linkedC-telopeptidesofTypeⅠcollagen,CⅠCPELISA試劑盒大鼠Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humancytokeratin17,CK-17ELISA試劑盒人細(xì)胞角蛋白17(CK17)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanGlycogenphosphorylaseII,GP-IIELISAKit人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
冷凍保存細(xì)胞之方法:
抗人pirin單抗雜交瘤細(xì)胞;IIIA3bC1E12D1培養(yǎng)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí), 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
白試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanGlycogenphosphorylaseBB,GP-BBELISAKit人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T