產(chǎn)品全稱:SmIg 進口檢測試劑盒
英文名稱:SmIg ELISA Kit
產(chǎn)品貨號:A097324
規(guī)格:48T/96T
服務(wù):公司產(chǎn)品僅用于科研可提供免費代測服務(wù),以及產(chǎn)品說明書和技術(shù)指導(dǎo)等
保存環(huán)境:2-8℃低溫、避光、防潮
主要成分:酶標(biāo)板,試劑,標(biāo)準品等
檢測目的:用于測定血清,血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本..需要而未提供
試劑盒組成及試劑配制 :
1. 酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96孔)。 2. 標(biāo)準品(Standard):2瓶(凍干品)。 3. 樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。 4. 標(biāo)記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。 5. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。 6. 標(biāo)記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100) 7. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100) 8. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。 9. 濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。 10. 終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。 |
樣本實驗前準備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。
(5)培養(yǎng)細胞
檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準。
檢測程序:
1. 加樣:每孔各加入標(biāo)準品或待測樣品 100ul ,將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2. 洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次,向濾紙上印干。
3. 每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
6. 洗板:同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul ,置 37 ℃ 暗處反應(yīng)15 分鐘。
8. 每孔加入100ul 終止液混勻。
9. 30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在 45 0 nm 處測 吸光值。
果菜檸檬比色法定量檢測試劑盒20次金
飲料檸檬比色法定量檢測試劑盒20次白花前胡甲素
糖果檸檬比色法定量檢測試劑盒20次人參皂 Rb2
食物檸檬比色法定量檢測試劑盒20次醋乙酯
酒類檸檬比色法定量檢測試劑盒20次川續(xù)斷皂乙
食油檸檬比色法定量檢測試劑盒20次蜂膠
紙類檸檬比色法定量檢測試劑盒20次腸上皮干蛋白抗體流式免疫組化
樣品檸檬比色法定量檢測試劑盒20次血小板源性生長因子受體-A抗體流式免疫組化
檸檬待測樣品處理試劑盒20次L-組氨鹽鹽一水物
酒類乙醇比色法定量檢測試劑盒20次1-羥基苯并三氮唑一水物
乳品乙醇比色法定量檢測試劑盒20次甘氨鎂
飲料乙醇比色法定量檢測試劑盒20次過氧化物(辣根)
調(diào)料乙醇比色法定量檢測試劑盒20次鹽克林素
細胞乙醇比色法定量檢測試劑盒20次2-氯苯甲
組織乙醇比色法定量檢測試劑盒20次丁二鈉六水合物
SmIg 進口檢測試劑盒LB肉湯(LB培養(yǎng)基)DISC1 C端抗體牛角藥勺
焦碳二乙酯DISC1 N端抗體不銹鋼藥刮
焦碳二乙酯多能發(fā)育相關(guān)基因2抗體不銹鋼藥鏟
焦碳二乙酯結(jié)腸直腸癌缺失基因抗體稱量紙
DEPC;焦碳二乙酯(sigma)多巴脫羧抗體稱量紙
飽和酚溶液(pH 7.9±0.2)防御素β1/Defensin β1抗體稱量紙
DEPC水(去RNase水)抗體玻璃比色皿
DNA Marker D(即用型)DLX4抗體玻璃比色皿