親和素與生物素系統(tǒng)的基本原理

 
    1．標(biāo)記親和素—生物素法(1abeledavidinbiotin，LAB)
    將親和素與標(biāo)記酶(HRP)結(jié)合，一個親和素可結(jié)合多個HRP；將生物素與抗體(一抗或二抗)結(jié)合，一個抗體分子可連接多個生物素分子，抗體的活性不受影響。細(xì)胞的抗原(或通過一抗)先與生物素化的抗體結(jié)合，繼而將酶標(biāo)記親和素結(jié)合在抗體的生物素上，如此多層放大提高了檢測抗原的敏感性。
 
    2．橋接親和素—生物素法(bridgedavidinbiotin，BAB)
    先使抗原與生物素化的抗體結(jié)合，再以游離親和素為“橋”物素連接，也可達(dá)到多層放大效果。將生物素化抗體與酶標(biāo)記生
 
    3．親和素—生物素—過氧化物酶復(fù)合物法(avidin-biotin-peroxidasecomplex，ABC)
    此方法為前兩種方法的改進(jìn)，即先按一定比例將親和素與酶標(biāo)生物素(或稱生物素化酶)結(jié)合，形成親和素—生物素—過氧化物酶復(fù)合物(ABC復(fù)合物)?？乖群笈c特異性一抗、生物素化二抗、ABC復(fù)合物(此ABC復(fù)合物不能飽和，即親和素上的4個結(jié)合位點zui多允許3個位點與生物素化酶結(jié)合，留1～2個位點與生物素化二抗結(jié)合)結(jié)合，zui終形成巨大復(fù)合體。因該復(fù)合體網(wǎng)絡(luò)了大量酶分子，從而提高了檢測的靈敏度。