免疫印跡常見的非特異性條帶高本底的問題
 
    (1)應對背景彌散的策略
    1)若用間接檢測技術，首先應考慮二抗是否與背景有關。觀察省去一抗時二抗單獨作用所產(chǎn)生的背景。若背景由二抗產(chǎn)生的，可采用以下措施：①縮短二抗的孵育時間；②試用高濃度的蛋白質(zhì)來吸附二抗。首先在二抗試劑內(nèi)加入3％BSA。若背景仍然存在，再試用抗原制品的原液(用丙酮臟粉較好)；③使用替代的二抗。
    2)使用不同的封閉緩沖液。
    3)若無別的選擇，可嘗試用5％脫脂奶粉／吐溫。
    4)滴定一抗和／或二抗的效價，找到一個產(chǎn)生的信號強度可以接受的較低濃度。
    5)縮短一抗和二抗的孵育時間。
    6)每一步都用RIPA緩沖液(1％NP40、0．5％DOC、0．1％SDS、150mmol／L NaC1和50mmol／LTris，pH8．0)沖洗印跡膜。
    7)在一抗和二抗試劑中加入1％NP-40或0．3％吐溫和3％BSA。
    8)延長每次清洗時間。
    (2)應對特異性背景條帶的策略
    1)若用間接檢測技術，首先應考慮二抗是否與背景有關。觀察省去一抗時二抗單獨作用所產(chǎn)生的背景。若背景條帶是由二抗產(chǎn)生的，首先使用替代的標記試劑。其次，試用抗原制品原液吸附二抗。丙酮粉較為適合。
    2)若使用單抗，可改用另一種單抗。但必須注意，若同一條帶持續(xù)存在，說明待測抗原和其他條帶之間存在氨基酸的同源性。
    3)若使用多克隆抗血清作為一抗，可試用不含待測抗原的蛋白質(zhì)制品吸附血清。