用蛋白A或蛋白G柱純化抗體
 
    1．所需試劑和特殊設備
    1．0mol/L Tris(pH8．0)；100mmol/L Tris(pH8．0)；10mmol／L Tris(pH8．0)；50mmol／L甘氨酸(pH3．0)；簡單的柱狀色譜儀。
    2．操作步驟．
    (1)加入1／10體積的1．0mol／LTris(pH8．0) 調(diào)含抗體樣品(血清，組織培養(yǎng)上清液或腹水)的pH值至8．0。
    (2)將抗體溶液通過蛋白A或蛋白G微球柱。這些柱中，每毫升的濕微球能結(jié)合大約10—20ml抗體(1個蛋白A或蛋白G微球分子結(jié)合2分子抗體)。記錄裝柱微球的大約體積。因為微球柱的體積決定使用清洗和洗脫緩沖液的量。
    (3)用10倍柱體積的100mmol／LTris(pH8．0)洗滌微球。
    (4)用10倍柱體積的10mm01／LTris(pH8．0)洗滌微球。
    (5)用50mmol／L甘氨酸(pH3．0)洗脫微球柱，每次加入約1／2柱體積的緩沖液，分次加入。用含1／10柱體積的1mol／LTris(pH8．0)的試管收集洗脫液，將各管緩慢搖勻，使其pH值恢復至中性。
(6)測定各收集管的280nm光密度，以得到蛋白含量(10D約相當于0．75mg／ml免疫球蛋白)?；蛴貌际先旧Y(jié)合斑點實驗(附錄Ⅱ)測定蛋白含量。將含抗體的收集管混合，并取2昭，用SDS-PAGE和考馬斯亮藍染色測總蛋白。純化的樣品應有清晰的輕、重鏈帶。