(一)原理

    琥珀酸脫氫酶(succinate dehydrogenase)是線粒體的標(biāo)志酶，參與細(xì)胞有氧呼吸，其活性與線粒體活性平行，在癌細(xì)胞中其活性常減弱。琥珀酸脫氫酶使底物琥珀酸鈉脫H+無(wú)色的四氮唑藍(lán)(nitroblue tetrazolium，NBT)獲得H+后被還原成藍(lán)色。ELISA試劑盒

(二)材料

1．80％丙酮、PBS、二甲苯、甘油明膠、乙醇(50％、70％、95％、100％)。

2．NBT工作液PBS(O．2mol／L)10ml、0．2mol／L琥珀酸鈉10ml、0．6mol／L NaHCO32ml、0．3mol／L CaCl20．2ml、0．03mol／L A1C130．2ml、NBT(1mg／ml)10ml，混勻后加水至40ml。

(三)方法

1．組織切片法

(1)80％丙酮于4℃固定組織切片標(biāo)本2min。

(2)4 ℃條件下用PBS清洗2次，各2min。

(3)置于NBT工作液中，37℃孵育15~35min。

(4)用蒸餾水洗2次，各lmin。

(5)用丙酮再固定5min，以甘油明膠濕封或用梯度乙醇脫水(兼再固定)，二甲苯透明，樹(shù)膠封片。若效果不理想，可試免去步驟(1)，并將PBS清洗條件該在室溫下進(jìn)行。ELISA試劑盒

(6)對(duì)照在工作液中不含底物或者在工作液中加入酶抑制劑丙二酸鈉，使其終濃度為3．7mg／ml。

2．冰凍切片法

(1)冰凍組織切片標(biāo)本制備。

(2)置于NBT工作液中，37℃孵育1h。

(3)用蒸餾水，晾干。

(4)2％甲基綠復(fù)染10min。

(5)水洗，晾干，油鏡觀察。

(四)結(jié)果

酶活性部位呈藍(lán)色，對(duì)照標(biāo)本不顯色。ELISA試劑盒