共價(jià)連接相互作用蛋白

 共價(jià)連接相互作用蛋白

   大多數(shù)蛋白-蛋白結(jié)合相互作用是瞬時(shí)的，只作為細(xì)胞內(nèi)信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)或其他代謝功能的一部分而短暫發(fā)生。通過交聯(lián)方法可以穩(wěn)定連接相互作用復(fù)合物中的成分，從而有助于鑒別這些瞬時(shí)接觸。一旦相互作用的成分被共價(jià)偶聯(lián)，可以使用其他步驟（例如細(xì)胞裂解，親和純化和電泳）來制備分析樣品，同時(shí)可維持初的相互作用復(fù)合物。

 同源雙功能交聯(lián)

   通過交聯(lián)用于蛋白相互作用分析簡(jiǎn)單的方法是通過向培養(yǎng)細(xì)胞或細(xì)胞裂解液中加入可以與氨基反應(yīng)的同源雙功能交聯(lián)劑（homobifunctional crosslinker）來實(shí)現(xiàn)的。交聯(lián)劑可以與其遇見的蛋白的伯胺（例如賴氨酸殘基的側(cè)鏈）反應(yīng)，不論是在細(xì)胞表面或是細(xì)胞內(nèi)（如果交聯(lián)劑是膜通透性的）。因此在分子種群中以高于某些頻率閾值相互作用的復(fù)合體中的蛋白將交聯(lián)。如果有可以檢測(cè)某種蛋白的抗體，則該相互作用復(fù)合物（自身二聚體化或蛋白-蛋白相互作用）在Western blotting分析時(shí)被檢測(cè)到條帶遷移。

   甲醛在這類實(shí)驗(yàn)中可作為簡(jiǎn)單的同源雙功能交聯(lián)劑或固定劑使用。交聯(lián)劑DSS （膜通透性）和BS3（膜不通透性）是常用于同源雙功能交聯(lián)的具有氨基反應(yīng)活性的NHS–ester試劑。在間隔臂含有可剪切二硫鍵的交聯(lián)劑（例如 DSP和 DTSSP）可以與相互作用蛋白偶聯(lián)，因此可以通過沉淀或相似方法被共同純化，之后通過還原性SDS-PAGE 被分離為構(gòu)成型亞基。通過精心設(shè)置的對(duì)照及適當(dāng)?shù)臋z測(cè)探針，同源雙功能交聯(lián)可作為蛋白相互作用初步研究的方法。

 用于質(zhì)譜分析的同源雙功能交聯(lián)

 當(dāng)使用質(zhì)譜（MS）進(jìn)行分析時(shí)，相互作用蛋白之間被交聯(lián)的片段，由于連接交聯(lián)劑分子而造成分子量的改變，從而可以被辨認(rèn)出來。我們提供配對(duì)的含有重氫和不含重氫的同源雙功能交聯(lián)劑，從而可以很容易在質(zhì)譜分析中鑒定交聯(lián)片段。

產(chǎn)品供應(yīng)列表：

上述產(chǎn)品用于科研，不可用于人體試驗(yàn)！

小編：wyf  2020.10.29