植物總DNA的快速少量抽提(CTAB法)@ 古朵生物

　　實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?了解植物DNA抽提的主要方法，掌握CTAB法快速抽提水稻DNA。

　　實(shí)驗(yàn)材料及試劑：水稻葉片，1.5×CTAB，氯仿/異戊醇(24:1)，95%乙醇或無(wú)水乙醇等

　　實(shí)驗(yàn)原理：植物DNA的抽提常采用兩種方法：

　　(1)SDS法： 離子去污劑，過(guò)程長(zhǎng)，純度高;

　　(2)CTAB法：該方法簡(jiǎn)便、快速，DNA產(chǎn)量高(純度稍次，適用于一般分子生物學(xué)操作)。 CTAB是一種非離子去污劑，植物材料在CTAB的處理下，結(jié)合65°C水浴使細(xì)胞裂解、蛋白質(zhì)變性、DNA被釋放出來(lái)。CTAB與核酸形成復(fù)合物，此復(fù)合物在高鹽(>0.7mM)濃度下可溶，并穩(wěn)定存在，但在低鹽濃度(0.1-0.5mM NaCl)下CTAB-核酸復(fù)合物就因溶解度降低而沉淀，而大部分的蛋白質(zhì)及多糖等仍溶解于溶液中。經(jīng)離心棄上清后，CTAB-核酸復(fù)合物再用70-75%酒精浸泡可洗脫掉CTAB。再經(jīng)過(guò)氯仿/異戊醇(24:1) 抽提去除蛋白質(zhì)、多糖、色素等來(lái)純化DNA，最后經(jīng)異丙醇或乙醇等DNA沉淀劑將DNA沉淀分離出來(lái)。

　　植物總DNA的快速少量抽提實(shí)驗(yàn)步驟：

　　1.采集適量幼嫩葉片，用液N2研成粉末，0.4 g裝入1.5ml離心管中(-20℃預(yù)冷)。

　　2.預(yù)熱1.5×CTAB到95℃，加1ml到裝有葉片粉末的離心管中，混勻(防止凍融)。

　　3.立即置于65℃水浴30min，每5分鐘，上下顛倒1次。

　　4.12000g離心5分鐘。

　　5.吸取上清液約600µl，加入等體積(600µl)氯仿/異戊醇(24:1)，上下顛倒數(shù)次，至下層液相呈深綠色為止。

　　6.12000g離心5分鐘。

　　7.取450µl上清于一新1.5ml離心管，加入1ml 95%乙醇和45µl 10M NH4AC)，混勻，室溫放置10min。

　　8.12000 g離心10min，去上清，用75% EtOH浸洗沉淀，自然干燥約30 min。

　　9.加入50µl 1/10 TE或無(wú)菌水(含20µg/RNase)，置于4℃過(guò)夜，待DNA溶解后，檢測(cè)DNA濃度及質(zhì)量。

　　植物總DNA的快速少量抽提 注意事項(xiàng)：

　　1.盡量取材幼嫩葉片，如太老，酚類物質(zhì)多，必須用10 mM的β-ME處理

　　2.研缽預(yù)凍，粉末至加CTAB前不要融化

　　3.24:1的氯仿/異戊醇抽提時(shí)動(dòng)作應(yīng)輕柔，轉(zhuǎn)移用的槍頭最好是剪寬了的

　　4.所用試劑必需滅菌，手套

　　植物總DNA的快速少量抽提 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵(lì)志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個(gè)國(guó)家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營(yíng)宗旨;牢固樹(shù)立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場(chǎng)需求為導(dǎo)向，不斷開(kāi)發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。