甲醇酵母表達常用溶液及緩沖液的配制

　　1.畢赤酵母表達常用溶液及緩沖液的配制

　　1.1 各種母液的配制

　　10*YNB：(含有硫酸銨、無氨基酸的13.4%酵母基礎氮源培養(yǎng)基) 4℃保存。34g酵母基礎氮源培養(yǎng)基(無硫酸銨)+100g硫酸銨，溶于1000ml水中，過濾除菌。

　　500*B：(0.02%生物su Biotin) 4℃保存 保存期為1年。20mg的生物su溶于100ml水中，過濾除菌。

　　100*H：(0.4%Histidine 組氨suan) 4℃保存 保存期為1年。400mg的L-組氨suan溶于100ml水中，(加熱至50℃以促進溶解)，過濾除菌。

　　10*D：(20%Dextrose 葡萄糖)保存期為1年。200g葡萄糖溶于1000ml水中，滅菌15min或過濾除菌。

　　10*M：(5%Methanol 甲醇) 保存期為2個月。將5ml的甲醇與95ml水混勻，過濾除菌。

　　10*GY：(10%Glycerol 甘油) 保存期為1年以上。將100ml甘油和900ml水混勻后，高壓滅菌或過濾除菌。

　　100*AA：(0.5% of each Amino Acid，各種氨基酸) 4℃保存 保存期為1年。分別將500mg的L-谷氨suan、L-蛋氨酸、L-賴氨酸、L-亮氨suan和L-異亮氨suan溶于100ml水中，過濾除菌。

　　1M 磷酸鉀溶液(potassium phosphate buffer，pH6.0)，將1mol/L的K2HPO4溶液132ml與1mol/L的KH2PO4溶液868ml混勻，其pH為6.0，如需調節(jié)pH，則使用磷酸和氫氧化鉀調節(jié)pH。

　　1.2 常用溶液及緩沖夜

　　1.2.1 堿裂解法抽提質粒DNA所用溶液：

　　溶液Ⅰ：50mmol / L glucose，100mmol / L EDTA，25mmol / L Tris-HCI (pH 8.0)

　　溶液Ⅱ：0.2mol/L NaOH，1% SDS(臨用時配制)

　　溶液Ⅲ：29.44g KAc，11.5ml Acetic acid，加ddH2O至100 ml。

　　4℃保存。

　　1.2.2 10% 甘油 (Glycerol)：

　　將100ml甘油和900ml水混勻后，高壓滅菌或過濾除菌。保存期為1年以上。

　　1.2.3 Rnase-H2O：

　　1ul Rnase 加入1ml 滅菌 dd H2O。4℃保存。

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