凋亡檢測實(shí)驗(yàn)——艾美捷喜-樹-堿(Camptothecin)基本操作

Background：

Camptothecin is a potent cytotoxic pentacyclic alkaloid known for its potent apoptosis inducing properties. Camptothecin and its analogs have been demonstrated to inhibit topoisomerase I (topo I), causing cells in S phase to enter into apoptosis. Camptothecin binds to and stabilizes the topo I – DNA backbone complex (covalent binary complex). This stabilized complex diminishes the rate of topo I release from the broken strand, thus slowing the religation and subsequent DNA synthesis process. Use camptothecin to create positive controls in apoptosis detection experiments.

Reagent Name Camptothecin

Target DNA topoisomerase I

Sample Type Cell culture

Storage -20°C

基本信息：

中文名：喜-樹-堿

英文名：Camptothecin

化學(xué)名：1H-Pyrano[34:6,7]indolizino[1,2-6]puinoline-3,14(4H,12H-)-dione,4-ethy1-4-hydroxy-(s)-

分子式: C20H16N2O4

分子量： 348.34

來　源： 珙桐科植物喜樹Camptotheca acuminata Decne的果實(shí)、葉。

喜-樹-堿是一種植物抗癌藥物，從中國中南、西南分布的喜樹中提取得到。1976年中國化學(xué)家高怡生等合成消旋喜-樹-堿成功。喜-樹-堿對腸胃道和頭頸部癌等有較好的近期療效，但對少數(shù)病人有尿血的副作用。10-羥基喜-樹-堿的抗癌活性超過喜-樹-堿，對肝癌和頭頸部癌也有明顯療效 ，而且副作用較少。

艾美捷喜-樹-堿是一種具有抗腫瘤特性的細(xì)胞毒性植物生物堿，是一種原型DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑。在凋亡檢測實(shí)驗(yàn)中使用喜-樹-堿創(chuàng)建陽性對照。

艾美捷喜-樹-堿(Camptothecin)基本操作：

1、將喜-樹-堿粉末溶解在組織培養(yǎng)級DMSO中，以獲得2mg/mL喜-樹-堿儲備濃度。

2、制備50–100µL的DMSO增溶喜-樹-堿等分試樣，并將其冷凍保存在<-20°C。一瓶冷凍的喜-樹-堿可在丟棄前再解凍2次。應(yīng)標(biāo)記已解凍1X的小瓶，以表明這一點(diǎn)，以便它們在丟棄前只經(jīng)過一次解凍。

3、喜-樹-堿濃度范圍為2–4µg/mL的刺突細(xì)胞培養(yǎng)物，產(chǎn)生6–12µM的細(xì)胞培養(yǎng)物喜-樹-堿濃度。該喜-樹-堿濃度范圍適用于誘導(dǎo)Jurkat或HL 60細(xì)胞懸浮液，其濃度范圍通常為1 x 105–1 x 106細(xì)胞/mL。在此濃度范圍內(nèi)，培養(yǎng)4小時(shí)（37°C）后成功誘導(dǎo)凋亡。

4、對特定細(xì)胞系進(jìn)行時(shí)間歷程研究，以確定合適的喜-樹-堿濃度和暴露時(shí)間，從而為實(shí)驗(yàn)實(shí)現(xiàn)良好的凋亡誘導(dǎo)水平。

艾美捷喜-樹-堿(Camptothecin)相關(guān)研究：

FAM-FLICA® Caspase-1 (YVAD) Assay Kit

Pyroptosis/Caspase-1 Assay, Green

FLICA 660 Caspase-1 Assay Kit

FAM FLICA® Caspase-1 (WEHD) Assay Kit

Magic Red® Cathepsin-B Assay Kit

Magic Red® Cathepsin L Assay Kit

FAM-FLICA®Caspase-1（YVAD）檢測試劑盒

焦下垂/Caspase-1測定，綠色

FLICA 660 Caspase-1檢測試劑盒

FAM FLICA®Caspase-1（WEHD）檢測試劑盒

Magic Red®Cathepsin-B分析試劑盒

Magic Red®組織蛋白酶L檢測試劑盒