活性氧（ROS）和活性氮（RNS）是公-認(rèn)的分子導(dǎo)致氧化應(yīng)激的有害影響。與氧化應(yīng)激的增加與幾種疾病狀態(tài)的發(fā)病機(jī)制有關(guān)。這個(gè)氧化應(yīng)激在血管疾病、糖尿病、腎缺血、動(dòng)脈粥樣硬化、肺疾病中的作用病理狀態(tài)、炎癥性疾病、癌癥以及衰老都已得到充分證實(shí)。自由的自由基和其他活性物質(zhì)在體內(nèi)不斷產(chǎn)生，對(duì)人體造成氧化損傷生物分子，這一過程受到多種抗氧化劑和修復(fù)系統(tǒng)的制約，如以及替換受損的核酸、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)。衡量抗氧化療法和ROS/RNS活性對(duì)抑制或治療氧化應(yīng)激至關(guān)重要誘導(dǎo)劑。

艾美捷體外活性氧/活性氮檢測(cè)試劑盒是一種用于測(cè)量總自由基含量的檢測(cè)試劑盒一個(gè)樣本。該分析使用專有的淬滅熒光探針，二氯二氫熒光素DiOxyQ（DCFH-DiOxyQ），是一種特定的ROS/RNS探針，基于與流行的2'，7'-二氯二氫熒光素二乙酸酯。DCFH DiOxyQ探頭首先用

然后以高反應(yīng)性DCFH形式穩(wěn)定反應(yīng)狀態(tài)下，ROS和RNS物質(zhì)可以與DCFH反應(yīng)，DCFH被迅速氧化成熒光2'，7'-二氯二氫熒光素（DCF）。熒光強(qiáng)度成比例與樣品內(nèi)的總ROS/RNS水平相關(guān)。DCFH DiOxyQ探針可與氫氣反應(yīng)過氧化物（H2O2）、過氧自由基（ROO）、一氧化氮（NO）和過氧亞硝酸根陰離子（ONO-). 這些自由基分子是ROS和RNS的代表，因此允許測(cè)量樣本中的總自由基群體。

該試劑盒也可以用于評(píng)估抗氧化劑對(duì)自由基的影響。該試劑盒的檢測(cè)靈敏度極限為10pMDCF和H2O2分別為40nM。每個(gè)試劑盒提供足夠的試劑，最多可進(jìn)行96次分析，包括標(biāo)準(zhǔn)曲線和未知樣品。

艾美捷體外活性氧/活性氮檢測(cè)試劑盒組分：

1. Priming Reagent (Part No. 234701): One 250 µL tube of solution.

2. Stabilization Solution (10X) (Part No. 234702): One 1.5 mL tube of solution.

3. Catalyst (250X) (Part No. 234703): One 20 µL tube of solution.

4. DCF-DiOxyQ (Part No. 234704): One 50 µL amber tube of solution in methanol.

5. DCF Standard (Part No. 234202): One 100 µL amber tube of a 1 mM solution in DMSO.

6. Hydrogen Peroxide (Part No. 234102): One 100 µL amber tube of an 8.821 M solution.

艾美捷體外活性氧/活性氮檢測(cè)試劑盒檢測(cè)原理：

該試劑盒是一種用于測(cè)量游離ROS/RNS總量的體外測(cè)定試劑盒自由基活性。用催化劑將未知的ROS或RNS樣品或標(biāo)準(zhǔn)加入到井中這有助于加速氧化反應(yīng)。短暫孵育后，制備的DCFH探針添加到所有孔中，并允許氧化反應(yīng)進(jìn)行。測(cè)量樣品對(duì)過氧化氫或DCF標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行熒光測(cè)定。在96孔中進(jìn)行測(cè)定可以在標(biāo)準(zhǔn)熒光板讀取器上讀取的熒光板格式。自由基通過與預(yù)定的DCF或氫進(jìn)行比較來確定未知樣品中的含量過氧化物標(biāo)準(zhǔn)曲線。

相關(guān)研究：

1.STA-330：OxiSelect™ TBARS測(cè)定試劑盒（MDA定量）

2.STA-340：OxiSelect™ 超氧化物歧化酶活性測(cè)定

3.STA-341：OxiSelect™ 過氧化氫酶活性測(cè)定試劑盒

4.STA-342：OxiSelect™ 細(xì)胞內(nèi)ROS測(cè)定試劑盒（綠色熒光）

相關(guān)文獻(xiàn)：

1. Bass DA, Parce JW, Dechatelet LR, Szejda P, Seeds MC, Thomas M. Flow cytometric studies of

oxidative product formation by neutrophils: A graded response to membrane stimulation. J

Immunol. 1983; 130:1910-1917.

2. Brandt R, Keston AS. Synthesis of diacetyldichlorofluorescin: A stable reagent for fluorometric

analysis. Anal Biochem. 1965; 11:6-9.

3. Keston AS, Brandt R. The fluorometric analysis of ultramicro quantities of hydrogen peroxide.

Anal Biochem.1965; 11:1-5.