ELISA，即酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)，其基本原理是將一定濃度的抗原或者抗體通過(guò)物理吸附的方法固定于聚苯乙烯微孔板表面，加入待檢標(biāo)本，通過(guò)酶標(biāo)物顯色的深淺間接反映被檢抗原或者抗體的存在與否或者量的多少。ELISA技術(shù)作為免疫標(biāo)記技術(shù)(包含免疫熒光技術(shù)，免疫放射技術(shù)，免疫酶技術(shù)和免疫膠體金技術(shù))中的一種，已廣泛應(yīng)用于科研和臨床實(shí)驗(yàn)中，具有快速、定性或者定量甚至定位的特點(diǎn)。
ELISA可用于測(cè)定抗原，也可以測(cè)定抗體。在這種測(cè)定方法中有3種必要的試劑：①固相的抗原或抗體；②酶標(biāo)記的抗原或抗體；③酶作用的底物。根據(jù)試劑的來(lái)源和標(biāo)本的性狀以及檢測(cè)的具備條件，可設(shè)計(jì)出各種不同類(lèi)型的檢驗(yàn)方法。
一、雙抗體夾心法
雙抗體夾心法，其基本原理是將一定量的包被抗體以物理吸附的方法固定于聚苯乙烯微孔板表面，加入無(wú)關(guān)蛋白載體封閉未結(jié)合位點(diǎn)，然后加入含有抗原之待測(cè)樣品，通過(guò)加入酶標(biāo)記特異性抗體后用TMB底物顯色，微孔板中顏色的深淺與待測(cè)物的濃度呈正相關(guān)。該方法適用于測(cè)定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原，不適用于測(cè)定半抗原及小分子單價(jià)抗原，因其不能形成兩位點(diǎn)夾心。
二、競(jìng)爭(zhēng)法
競(jìng)爭(zhēng)法一般分為直接競(jìng)爭(zhēng)法和間接競(jìng)爭(zhēng)法，這里我們以直接競(jìng)爭(zhēng)法為例進(jìn)行原理講解。直接競(jìng)爭(zhēng)法，其基本原理是：將合適濃度的包被抗體包被于微孔板中，加入無(wú)關(guān)蛋白載體封閉未結(jié)合位點(diǎn)，加入標(biāo)準(zhǔn)品(樣本)和生物素標(biāo)記的抗原物質(zhì)進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，經(jīng)合適的溫度和一定時(shí)間的孵育，洗滌后，加入HRP標(biāo)記的鏈霉親和素進(jìn)行反應(yīng)，TMB顯色，微孔板中顏色的深淺與待測(cè)物的濃度呈負(fù)相關(guān)。該方法一般用來(lái)檢測(cè)具有較少表位的小分子物質(zhì)，當(dāng)然，這種方法也可以用來(lái)檢測(cè)大分子抗原物質(zhì)甚至是抗體。檢測(cè)大分子抗原物質(zhì)時(shí)，由于空間位阻的影響，使得該檢測(cè)方法沒(méi)有雙抗體夾心法檢測(cè)大分子抗原物質(zhì)靈敏度高。
三、間接法測(cè)抗體
間接法一般用來(lái)檢測(cè)抗體。其基本原理是：將一定量的抗原物包被于聚苯乙烯微孔板，加入無(wú)關(guān)蛋白載體封閉未結(jié)合位點(diǎn)后，加入待測(cè)樣本，然后加入酶標(biāo)二抗，經(jīng)孵育和洗滌后，加底物顯色。本法只要更換不同的固相抗原，可以用一種酶標(biāo)抗體檢測(cè)各種與抗原相應(yīng)的抗體。主要用于對(duì)病原體的檢測(cè)而進(jìn)行傳染病的診斷。
四、雙抗原夾心法測(cè)抗體
雙抗原夾心法，與雙抗體夾心法類(lèi)似，基本原理是將已知濃度的抗原固定于聚苯乙烯微孔板表面，對(duì)未結(jié)合位點(diǎn)用無(wú)關(guān)蛋白載體進(jìn)行封閉后，加入待檢樣本，然后加入生物素標(biāo)記的抗原和HRP標(biāo)記的鏈霉親和素，經(jīng)TMB顯色和終止反應(yīng)，酶標(biāo)儀讀數(shù)之后即可計(jì)算待測(cè)物濃度。雙抗原夾心法與間接法都可以對(duì)抗體進(jìn)行檢測(cè)。
五、捕獲法測(cè)抗體
由于我們檢測(cè)樣本中的IgM含量時(shí)，其中同時(shí)含有較高濃度的IgG類(lèi)抗體，后者會(huì)干擾IgM抗體的測(cè)定。因此測(cè)定IgM抗體多用捕獲法。其基本原理是：將抗IgM抗體包被于固相微孔板，用無(wú)關(guān)蛋白載體對(duì)未結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行封閉后，加入待測(cè)樣本，接著加入抗原物質(zhì)，然后加入針對(duì)該抗原的經(jīng)生物素標(biāo)記的特異性抗體和HRP標(biāo)記的鏈霉親和素，經(jīng)TMB底物顯色和終止反應(yīng)后即可計(jì)算濃度。
