當(dāng)樣本細胞數(shù)少的時候，你應(yīng)該如何進行樣本處理？這個問題，曾經(jīng)很多做實驗的都碰到過，尤其是做小動物的，例如做小鼠的胰腺組織，往往只能分離出不多的細胞，處理中又很容易丟掉，導(dǎo)致最后上機獲取到的細胞寥寥wu幾，給結(jié)果解讀帶來很大困難。
因此，重要的是，如何盡量避免丟失，保障有足夠的細胞進行實驗?zāi)?。在Cyt-Geist中，匯總了以下建議，相信對遇到相同困境的FLOWER會有較大幫助：
1、建議從野生型或其他相同細胞來源獲取細胞摻入進去。如果感興趣的細胞標(biāo)記了熒光蛋白，那么可以使用沒有熒光蛋白標(biāo)記的野生型細胞來增加細胞數(shù)量，這樣既可以區(qū)分出感興趣的細胞，又使分析過程中的細胞損失降至最di。因為細胞丟失率是一定的，當(dāng)細胞總量增加后，盡管你的目標(biāo)細胞比例減少了，但是丟失的絕對數(shù)也相應(yīng)減少。
2、建議使用細胞系進行實驗。在某些研究中，可以使用從感興趣細胞建立的細胞系，這些細胞可以代替感興趣的細胞來建立電壓和設(shè)門等條件，這樣可以大大減少樣本的消耗，實現(xiàn)樣本最大價值。
3、與血液不同，來自實體器官的原代細胞在用于流式分析之前，必須經(jīng)過數(shù)個涉及機械和酶解等步驟。由于這些解離步驟，細胞完整性可能受到損害。為了保證樣品質(zhì)量和細胞數(shù)量，需要關(guān)注解剖手法和解離方案的優(yōu)化。除了優(yōu)化解離程序外，還應(yīng)優(yōu)化整個實驗中使用的溫度條件。建議使用目標(biāo)細胞優(yōu)化這些條件，或者至少使用與目標(biāo)細胞相似的細胞(即衍生細胞系)。優(yōu)化條件和方案可以更好地解離細胞，并將解離時間最小化，從而保持細胞完整性。
4、為了使細胞在準(zhǔn)備步驟中保持“happy”和活性，建議使用無血清培養(yǎng)基，而不是常規(guī)使用的磷酸鹽緩沖液(PBS)。應(yīng)確保所使用的緩沖液不含酚紅，否則可能干擾分析。另外，應(yīng)考慮用于優(yōu)化緩沖液，例如HEPES緩沖液在室溫下的pH值優(yōu)于磷酸鹽緩沖液，這使其成為流式細胞術(shù)樣品制備的理想選擇。
