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辛基-瓊脂糖凝膠 H.P.參數(shù)說(shuō)明

中文名：辛基-瓊脂糖凝膠 H.P. 

英文名：octyl -Sepharose H.P.

供應(yīng)商：上海遠(yuǎn)慕

規(guī)格：25ml、100ml、500ml

性狀：白色微球

凝膠類型：疏水層析介質(zhì)

粒徑： 45-165µm

工作PH值：3-13

應(yīng)用：疏水層析介質(zhì)，適合生物大分子和疫苗的分離純化等。

辛基-瓊脂糖凝膠 H.P. 

辛基-瓊脂糖凝膠 H.P.分離技巧

1、分離時(shí)流速不可太快，切切不可心急，所謂欲速則不達(dá);接餾分時(shí)可開全速，節(jié)省時(shí)間。

2、柱子盡可能長(zhǎng)，葡聚糖凝膠柱長(zhǎng)的增加將極大地改善分離，所不要吝惜填料，寧可將填料全裝在一根大柱子中，不要將填料裝成幾根小柱。所謂集中優(yōu)勢(shì)兵力，打擊敵人。

3、餾分一定要接的細(xì)，可1/10，或1/20 個(gè)保留體積接成一餾分。

4、洗脫體積一般為2-3個(gè)保留體積，對(duì)特殊保留強(qiáng)的化合物，可洗脫5個(gè)保留體積。

5、鞣質(zhì)成分死吸附嚴(yán)重，如不在乎填料者，可用Sephadex LH20 分鞣質(zhì)

6、葡聚糖凝膠對(duì)黃酮類成分的分離效果，方法很成型，有大量文獻(xiàn)參考。

7、填料反復(fù)使用，每次用完，一般可用甲醇將柱子洗干凈，然后用下一次分離的起步溶劑將甲醇替換出來(lái)，待用。暫時(shí)不用試可以水洗→含水醇洗(醇的濃度逐步遞增)→醇洗，zui后泡在醇中貯于磨口瓶中備用。如長(zhǎng)期不用時(shí)，可在以上處理基礎(chǔ)上，減壓抽干，再用少量乙迷洗凈抽干，室溫充分揮散至無(wú)醚味后，60～80°C干燥后保存。

辛基-瓊脂糖凝膠 H.P.使用方法

1.裝柱：

a、讓所有的材料和試劑達(dá)到室溫；配制初始緩沖液(平衡液)和洗脫緩沖液。

b、根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始緩沖液(按凝膠：緩沖液=3：1的比例)配成勻漿。

c、將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一小段液位(液面略高于濾膜)，務(wù)必使底端無(wú)氣泡。

d、用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意勿使產(chǎn)生氣泡；打開柱子出液口，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。

e、打開蠕動(dòng)泵，讓緩沖液用使用時(shí)流速的1.33倍的流速流過(guò)，使柱床穩(wěn)定；用2~3柱體積的緩沖液平衡柱子。

2.平衡：

讓平衡緩沖液以一定流速流過(guò)柱子，到流出液電導(dǎo)和pH不變；平衡緩沖液一般是高鹽濃度的緩沖液，如0.02~0.05mol/L的PBS加1~2.5mol/L(NH4)2SO4等。

3.上樣：

a、樣品用平衡液配制，渾濁的樣品要離心和過(guò)濾后上樣。

b、一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上，用平衡液洗去雜質(zhì)，再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)品。

c、介質(zhì)對(duì)樣品組分吸附的程度取決于樣品的疏水性質(zhì)、流動(dòng)相的離子強(qiáng)度和溫度；鹽濃度大、溫度高或樣品組分疏水性強(qiáng)，介質(zhì)對(duì)組分吸附牢。

4.洗脫：

疏水介質(zhì)可用減小鹽濃度進(jìn)行洗脫；加表面活性劑或有機(jī)溶劑可加強(qiáng)洗脫；zui常用的洗脫液是低鹽濃度緩沖液，如0.02~0.05mol/L的PBS。

5.再生：

一般用低鹽濃度的緩沖液洗，洗10倍以上柱體積，接著用結(jié)合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用；若有失活蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)在再生時(shí)洗不掉，可用在位清洗(CIP)除去。

6.在位清洗：

a、對(duì)于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白，可以用2MNacl去除。

b、對(duì)沉淀蛋白、對(duì)以疏水性結(jié)合的蛋白或脂類，可用1MNaOH去除。

c、對(duì)強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂類等，用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，但要注意有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產(chǎn)生氣泡；清洗完畢后，用至少3倍緩沖液平衡柱子。

7.去熱源：

用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5~6小時(shí)或用0.1M的氫氧化鈉24小時(shí)；或用以下方法步驟去除：

a、2倍柱體積的70%乙醇；

b、2倍柱體積50mMTris-HclpH7.5；

c、1倍柱體積4M尿素；

d、3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1MNaCl；上緩沖液都在無(wú)熱源的雙蒸水中配制。

8.消毒：

用0.5~1MNaOH室溫下洗8~10倍柱體積，初始緩沖液平衡柱子。

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