羧甲基-瓊脂糖凝膠 CL-6B操作步驟，分離技巧，參數(shù)說明等由上海遠(yuǎn)慕生物提供介紹，作為一家專業(yè)從事科研試劑的老牌商家，現(xiàn)貨供應(yīng)ELISA試劑盒，動物血清，標(biāo)準(zhǔn)品對照品，培養(yǎng)基，抗體，多肽，酶類，抗原，實(shí)驗(yàn)耗材，染色液，化學(xué)試劑，生化試劑，其他試劑等，價(jià)格實(shí)惠，品種齊全，訂購！

羧甲基-瓊脂糖凝膠 CL-6B參數(shù)說明

中文名：羧甲基-瓊脂糖凝膠 CL-6B

英文名：CM Sepharose CL-6B

供應(yīng)商：上海遠(yuǎn)慕

規(guī)格：100ml、500ml

操作溫度：4-40℃

性狀：白色膠體

保存溫度：4-8℃

類型：凝膠過濾填料,凝膠層析介質(zhì)

用途：親和層析介質(zhì)

應(yīng)用：蛋白、多肽、多糖的分離、分子量測定等

羧甲基-瓊脂糖凝膠 CL-6B

羧甲基-瓊脂糖凝膠 CL-6B操作步驟

1、裝柱

凝膠過濾介質(zhì)的使用對裝柱的要求較高，為了保證分離效果，一般通過柱子上加一個(gè)裝柱器來使分離柱裝滿凝膠，或采用帶有軸向加壓裝置的柱子。凝膠柱床一般高于60cm。裝柱效果可用染料或丙酮-水溶液進(jìn)行檢驗(yàn)。

以下過程為通用介質(zhì)裝填過程。若為帶有軸向加壓裝置的柱子，可在柱床穩(wěn)定后將柱床壓緊，接好管路；讓所有的材料和試劑達(dá)到室溫。配制緩沖液。凝膠層析上樣、平衡和洗脫只用一種低鹽濃度的緩沖液。

選擇一根一定直徑的柱子，長約30~60cm,根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠(約為柱床體積的1.15倍)，清洗掉20%乙醇，抽干，用緩沖液(按凝膠：緩沖液=3：1的比例)配成勻漿。不要?jiǎng)×覕噭?，以免攪壞微球?/p>

將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位(液面略高于濾膜)，務(wù)必使底端無氣泡；用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。

打開蠕動泵，讓緩沖液緩慢流過，使柱床穩(wěn)定；用一個(gè)裝柱器輔助裝柱。裝完后柱床上端輕輕刮平，上好柱頭。

2、平衡

讓緩沖液以一定流速流過柱子，到流出液電導(dǎo)和pH不變。

3、上樣

樣品用緩沖液配制，渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。含鹽量過大、濃度過小的樣品要先做處理，再上樣；介質(zhì)對樣品組分的分離是按組分分子量大小進(jìn)行的，分子量大的先流出來；上樣體積約為柱體積的1~2%，越小分離越好。

4、洗脫

用緩沖液洗脫，洗脫中保持流速、緩沖液組成不變。

5、再生

一般用緩沖液洗到平衡，可再次使用。

6、注意

在裝柱、使用和保存柱子的時(shí)候，始終要避免柱子流干氣泡進(jìn)入。

羧甲基-瓊脂糖凝膠 CL-6B分離技巧

1、分離時(shí)流速不可太快，切切不可心急，所謂欲速則不達(dá);接餾分時(shí)可開全速，節(jié)省時(shí)間。

2、柱子盡可能長，葡聚糖凝膠柱長的增加將極大地改善分離，所不要吝惜填料，寧可將填料全裝在一根大柱子中，不要將填料裝成幾根小柱。所謂集中優(yōu)勢兵力，打擊敵人。

3、餾分一定要接的細(xì)，可1/10，或1/20 個(gè)保留體積接成一餾分。

4、洗脫體積一般為2-3個(gè)保留體積，對特殊保留強(qiáng)的化合物，可洗脫5個(gè)保留體積。

5、鞣質(zhì)成分死吸附嚴(yán)重，如不在乎填料者，可用Sephadex LH20 分鞣質(zhì)

6、葡聚糖凝膠對黃酮類成分的分離效果，方法很成型，有大量文獻(xiàn)參考。

7、填料反復(fù)使用，每次用完，一般可用甲醇將柱子洗干凈，然后用下一次分離的起步溶劑將甲醇替換出來，待用。暫時(shí)不用試可以水洗→含水醇洗(醇的濃度逐步遞增)→醇洗，zui后泡在醇中貯于磨口瓶中備用。如長期不用時(shí)，可在以上處理基礎(chǔ)上，減壓抽干，再用少量乙迷洗凈抽干，室溫充分揮散至無醚味后，60～80°C干燥后保存。

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