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上海士鋒生物科技有限公司
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用FDA染色測定花粉的育性和活力

時間:2015-1-12閱讀:3448
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花粉粒有可育和不育兩種,通過一種可以指示膜的完整性的酶對花粉粒進行染色,由于只有可育的花粉在顯微鏡下可以觀察到熒光,而不育的美譽,因此可以將兩者區(qū)別。
 
一、材料和試劑
1.  BKbufferS 15 M OPSpH7.5

2.  醋酸熒光素(FDA)

3.  Source:擬南芥花粉

4.  取樣:開花期

5.  染色:Stock醋酸熒光素(FDA)溶液2 mg FDA/mlof丙酮(在離心管中-20°C保存)。
 
二、設(shè)備
1.  熒光顯微鏡
 
三、步驟
1.  取1 ul FDA母液加入到1mloftheBKbufferS 15 M OPS,pH7.5。

注意:FDA母液非常易揮發(fā)–混合FDA-buffer時不要超過2個小時。

2.  Mounting:滴一滴FDA-buffer混合液到用酒精清洗過的載玻片上,放上一些花粉粒到溶液里,蓋上蓋玻片。

3.  觀察:在藍(lán)光下(wavelength=495 nm)用光學(xué)顯微鏡觀察。有活力的花粉粒顯示熒光(FCR+)。

注意:醋酸熒光素,是無極性、無熒光的分子,穿入到花粉粒中。它被花粉的酯酶類水解釋放熒光素,一個極性熒光分子,當(dāng)花粉粒的膜是完整的,熒光素會在花粉粒的內(nèi)徑積累,就會在藍(lán)光下顯示熒光。FCR檢測可以讓我們知道花粉粒酯酶的活性和膜的完整性。

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