一、核心技術(shù)介紹

實時無標(biāo)記動態(tài)細(xì)胞分析技術(shù)（RTCA，Real Time Cellular Analysis）是通過特殊工藝，將微電子細(xì)胞傳感器芯片整合到細(xì)胞檢測板的底部，用以構(gòu)建實時、動態(tài)、定量跟蹤細(xì)胞形態(tài)和增殖分化等改變的細(xì)胞阻抗檢測傳感系統(tǒng)。當(dāng)貼壁生長在微電極表面的細(xì)胞引起貼壁電極界面阻抗的改變時，這種改變與細(xì)胞的實時功能狀態(tài)改變呈相關(guān)性，通過實時動態(tài)的電極阻抗檢測可以獲得細(xì)胞生理功能相關(guān)的生物信息，包括細(xì)胞生長、伸展、形態(tài)變化、死亡和貼壁等。

二、主要儀器及設(shè)備

xCELLigence或iCELLigence 細(xì)胞功能分析儀及對應(yīng)的E-Plate檢測板、超凈工作臺、CO2培養(yǎng)箱、低速離心機(jī)、移液器、細(xì)胞計數(shù)板、光學(xué)顯微鏡。

三、實驗步驟

1、向E-Plate檢測板中加入培養(yǎng)基并測定背景阻抗值。

2、收集對數(shù)期細(xì)胞并計數(shù)，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度，向E-Plate檢測板中加入一定  體積的細(xì)胞，室溫超凈臺內(nèi)放置30min。

3、將加入細(xì)胞的E-Plate檢測板放入檢測臺上（檢測臺預(yù)先放入培養(yǎng)箱中），  進(jìn)行實時動態(tài)的細(xì)胞增殖檢測。

4、過夜檢測后，向各培養(yǎng)孔中加入配制好的梯度藥物并繼續(xù)進(jìn)行實時動態(tài)檢測， 即可獲得化合物介導(dǎo)的細(xì)胞效應(yīng)曲線及不同時間段IC50值。

四、實驗結(jié)果實例

典型的利用RTCA技術(shù)獲得的細(xì)胞增殖實驗檢測結(jié)果：

圖1. 接種不同密度的A549細(xì)胞獲得的細(xì)胞增殖實時動態(tài)曲線

利用RTCA技術(shù)獲得的典型的細(xì)胞毒性實驗檢測結(jié)果：

圖2. Taxol引起的濃度依賴性作用曲線及軟件自動生成的IC50值

五、與傳統(tǒng)方法（MTT）對比優(yōu)勢

1、實驗操作簡單，步驟少，人為誤差小。

2、采用無標(biāo)記方法，不存在標(biāo)記效率問題，并且對細(xì)胞無損傷，細(xì)胞在zui接近生理狀態(tài)下進(jìn)行檢測，結(jié)果準(zhǔn)確度高。

3、實驗結(jié)果客觀，重復(fù)性好，不需設(shè)置重復(fù)孔（實驗操作需規(guī)范，如有特殊要求也可設(shè)置重復(fù)孔）。

4、因預(yù)先對基礎(chǔ)阻抗值測定，所以無需設(shè)置空白對照孔。

5、完整細(xì)胞效應(yīng)圖譜，提供大量、重要的動態(tài)反應(yīng)信息。

六、延伸實驗

可通過對細(xì)胞增殖及毒性的實時檢測，確定細(xì)胞變化的關(guān)鍵時間點(diǎn)，檢測后的細(xì)胞樣品可用于細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察、Western blot、Elisa、細(xì)胞凋亡及免疫熒光等細(xì)胞檢測實驗。