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蛋白免疫印跡技術(shù)2015/5/21

免疫印跡（immunoblotting）又稱蛋白質(zhì)印跡（westernblot），它是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。westernblot是在凝膠電泳和固相免疫測定技術(shù)基礎(chǔ)上...

核酸凝膠電泳觀察法2015/5/19

實(shí)驗(yàn)原理：瓊脂糖是海藻中提取的線狀高聚物，不同濃度的瓊脂糖密度不同，一般PCR產(chǎn)物使用2%濃度，0.5Kb-10Kb的DNA使用1%濃度，基因組DNA使用0.3%-0.7%濃度；不同大小的核酸在同一濃...

離子交換柱純化蛋白的問題2015/5/13

采用離子交換柱純化蛋白時(shí)，洗脫采用的離子強(qiáng)度的大小范圍應(yīng)該如何確定，可以根據(jù)什么來調(diào)整洗脫時(shí)的離子強(qiáng)度？離子交換純化是利用離子交換劑上的可解離基團(tuán)（活性基團(tuán)）對(duì)各種離子的親和力不一樣人達(dá)到分離的目的的...

超濾實(shí)驗(yàn)基本步驟2015/4/24

1.配料；2.檢查出口閥門是否關(guān)閉，攪拌料漿；3.啟動(dòng)泵，打開出口閥，開始超濾；4.改變壓力，觀察不同壓力對(duì)超濾的影響；5.配制不同濃度的懸浮液進(jìn)行超濾，觀察懸浮液濃度對(duì)超濾的影響；6.關(guān)閉泵，結(jié)束實(shí)...

蛋白純化經(jīng)驗(yàn)指南2015/4/14

1）我現(xiàn)在手頭有個(gè)融合蛋白，純化的時(shí)候用助溶劑溶解后做了GST親和層析，之后用蛋白酶切割后卻發(fā)現(xiàn)目的蛋白沒有活性。請問有哪些可能會(huì)出現(xiàn)這種原因？怎么解決？測過基因序列，沒有問題。細(xì)胞破碎后，融合蛋白在...

Adeno-X 表達(dá)系統(tǒng)----Z有效的腺病毒系統(tǒng)之一2015/4/1

在人細(xì)胞中快速、高水平地表達(dá)目的蛋白在2至3個(gè)星期內(nèi)即可獲得價(jià)的病毒無需噬斑純化靶細(xì)胞可以是分裂或不分裂的細(xì)胞（dividing/ornondividingcell）CLONTECH的Adeno-X?...

原核表達(dá)操作步驟及注意事項(xiàng)2015/3/27

克隆化基因插入合適載體后導(dǎo)入大腸桿菌用于表達(dá)大量蛋白質(zhì)的方法一般稱為原核表達(dá)。這種方法在蛋白純化、定位及功能分析等方面都有應(yīng)用。大腸桿菌用于表達(dá)重組蛋白有以下特點(diǎn)：易于生長和控制；用于細(xì)菌培養(yǎng)的材料不...

重組蛋白純化的基本策略2015/3/25

三階段純化策略純化問題所涉及的具體步驟zui終取決于樣品的性質(zhì)。但也有共同可參考的階段捕獲階段：目標(biāo)是澄清、濃縮和穩(wěn)定目標(biāo)蛋白。中度純化階段：目標(biāo)是除去大多數(shù)大量雜質(zhì)，如其它蛋白、核酸、內(nèi)毒素和病毒等...

Pichia酵母表達(dá)系統(tǒng)使用心得2015/3/12

甲醇酵母表達(dá)系統(tǒng)有不少優(yōu)點(diǎn)，其中以Invitrogen公司的Pichia酵母表達(dá)系統(tǒng)zui為人熟知，并廣泛應(yīng)用于外源蛋白的表達(dá)。雖然說酵母表達(dá)操作簡單表達(dá)量高，但是在實(shí)際操作中，并不是每個(gè)外源基因都能...

現(xiàn)代生物分離技術(shù)在多肽蛋白質(zhì)分離純化中的應(yīng)用2015/3/10

一、前言隨著基因工程和細(xì)胞工程的發(fā)展，盡管傳統(tǒng)的分離方法（如溶劑萃取技術(shù)）已在抗生素等物質(zhì)的生產(chǎn)中廣泛應(yīng)用，并顯示出優(yōu)良的分離性能，但它難以提取和分離蛋白質(zhì)。其主要原因有兩個(gè)：被分離對(duì)象——蛋白質(zhì)等在...

動(dòng)物淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的分離2015/1/27

實(shí)驗(yàn)材料：1.哺乳動(dòng)物胸導(dǎo)管淋巴管2.1×PBS，含青霉素100u/ml和鏈霉素100μg/ml，pH7.43.0.2%Ⅰ型膠原酶4.眼科剪，眼科鑷5.慕絲線（7號(hào)線）、細(xì)鐵絲6.離心管（15ml、5...

支原體污染以及檢測2015/1/21

支原體是一種大小介于細(xì)菌和病毒之間(zui小直徑0.2um)并獨(dú)立生活的微生物，約有1%可通過濾菌器。支原體無細(xì)胞壁形態(tài)呈高度多形性，可為圓形、絲狀或梨形。支原體形態(tài)多變，在光境下不易看清內(nèi)部結(jié)構(gòu)。電...

培養(yǎng)物的污染及防止2015/1/19

按現(xiàn)代的觀念，凡是混入培養(yǎng)環(huán)境中對(duì)細(xì)胞生存產(chǎn)生有害的成分和造成細(xì)胞不純的異物都應(yīng)該視為污染。根據(jù)這一概念，組織培養(yǎng)污染物應(yīng)包括生物（真菌、細(xì)菌、病毒和支原體）、化學(xué)物質(zhì)（影響細(xì)胞生存、非細(xì)胞所需的化學(xué)...

Alarmablue法檢測細(xì)胞活力2015/1/12

一、材料1.Resazurin細(xì)胞活力檢測試劑盒（Biotium，Inc.30025）2.細(xì)胞：在本試驗(yàn)中，使用了三種人類前列腺癌細(xì)胞系進(jìn)行檢測。（1）DU145（ATCC，HTB-81）（2）PC3...

細(xì)胞計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)2015/1/8

實(shí)驗(yàn)?zāi)康模赫莆占?xì)胞計(jì)數(shù)的方法。了解區(qū)分細(xì)胞存活狀態(tài)的方法。實(shí)驗(yàn)用品：0.4%臺(tái)盼藍(lán)溶液、無水乙醇或95%乙醇溶液、脫脂棉普通顯微鏡、試管、吸管、毛細(xì)吸管、細(xì)胞計(jì)數(shù)板、綢布。實(shí)驗(yàn)原理：在細(xì)胞培養(yǎng)工作中，...