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一、材料
1. Resazurin細(xì)胞活力檢測試劑盒(Biotium,Inc.30025)
2. 細(xì)胞:在本試驗(yàn)中,使用了三種人類前列腺癌細(xì)胞系進(jìn)行檢測。
(1)DU145(ATCC,HTB-81)
(2)PC3(ATCC,CRL-1435)
(3)LNCap(ATCC,CRL-1740)
二、儀器
1. SpectraPLUS酶標(biāo)儀
三、步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備:
(1)在96孔板中加入100 μL 培養(yǎng)基,然后接種適量細(xì)胞,貼壁細(xì)胞控制在40~10 000/孔,懸浮細(xì)胞控制在2 000~500 000/孔。用100 μL 不加入細(xì)胞的培養(yǎng)基作為空白對照。
(2)在培養(yǎng)基中加入10 μL resazurin溶液,37℃過夜培養(yǎng)細(xì)胞(1~24小時)。
(3)使用微量酶標(biāo)儀分別檢測570 nm 和600 nm 下的吸光值。
(4)獲得每一個樣品的在OD570和OD600下的吸光值,制作標(biāo)準(zhǔn)曲線來確定試驗(yàn)中的zui適細(xì)胞濃度。
2. 細(xì)胞活力分析:
(1)選擇zui適的細(xì)胞濃度,使用96孔板進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。對于人類前列腺癌細(xì)胞DU145,PC3andLNcap,經(jīng)常使用的濃度是2 000-5 000/孔。
(2)根據(jù)你設(shè)計的試驗(yàn),在對應(yīng)的孔中加入相應(yīng)試劑對細(xì)胞進(jìn)行處理一段時間。
(3)在培養(yǎng)基中加入10 μL resazurin溶液,37℃過夜培養(yǎng)細(xì)胞(1-24小時)。
(4)使用微量酶標(biāo)儀分別檢測570 nm 和600 nm 下的吸光值。
(5)獲得每一個樣品的在OD570和OD600下的吸光值,區(qū)分處理的樣品和對照樣品的吸光值,將對照樣品的吸光值設(shè)置為100%來計算處理后細(xì)胞的活力。
(6)細(xì)胞活力=(檢測樣品的OD值)/(對照樣品的OD值)x100%
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