【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

1.產(chǎn)品名稱：兔氣管上皮細(xì)胞操作步驟

2.組織來源：氣管組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×10^5cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

兔氣管上皮細(xì)胞分離自氣管組織；氣管（Trachea），呼吸器官的一部分；為后壁略平的圓筒型管狀。上端平第六頸椎下緣，與環(huán)狀軟骨相連；向下至第四、五胸椎體（相當(dāng)胸骨角平面）交界處，分左、右主支氣管，分叉處稱為氣管杈。氣管主要由14-16個(gè)半環(huán)狀軟骨構(gòu)成，有彈性，軟骨為“C”字形的軟骨環(huán)，缺口向后，各軟骨環(huán)以韌帶連接起來，環(huán)后方缺口處由平滑肌和致密結(jié)締組織連接，保持了持續(xù)張開狀態(tài)。管腔襯以粘膜，表面覆蓋纖毛上皮，粘膜分泌的粘液可粘附吸入空氣中的灰塵顆粒，纖毛不斷向咽部擺動(dòng)將粘液與灰塵排出，以凈化吸入的氣體。氣管上皮是氣道與外界環(huán)境接觸的*道防線，不僅是各種病原體、炎癥介質(zhì)作用的靶細(xì)胞，還作為效應(yīng)細(xì)胞合成、釋放多種炎性介質(zhì)和細(xì)胞因子從而參與氣道炎癥及免疫反應(yīng)。體外培養(yǎng)的原代氣管上皮細(xì)胞因與體內(nèi)組織在形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動(dòng)上存在很大的相似性，因此，在基礎(chǔ)及臨床研究中極為重要。

本公司的兔氣管上皮細(xì)胞采用*-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10^5cells/瓶；細(xì)胞經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

5.培養(yǎng)基信息：

M199、FBS、上皮細(xì)胞生長添加劑、Hydrocortisone、Insulin、Transferrin、Epinephrine、Penicillin、Streptomycin等

冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(shí)(或隔夜)→液氮槽*儲存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時(shí)，以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
操作步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
優(yōu)勢：
1、細(xì)胞株種類齊全，包括腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞、耐藥細(xì)胞株，如：人滑膜細(xì)胞，人胃癌細(xì)胞，人細(xì)胞，人腎近曲小管上皮細(xì)胞，肝癌細(xì)胞，心肌細(xì)胞，子宮內(nèi)膜細(xì)胞等
2、*，專業(yè)的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)指導(dǎo)
3、購買本公司的細(xì)胞株，免費(fèi)復(fù)蘇
4、客戶收到細(xì)胞后一天回傳細(xì)胞圖片，三天回傳細(xì)胞生長狀態(tài)圖片，五天內(nèi)有問題公司負(fù)責(zé)重發(fā)，超過五天時(shí)限至一個(gè)月內(nèi)重發(fā)細(xì)胞收半價(jià)，超過一個(gè)月重發(fā)全額收費(fèi)。
5、經(jīng)濟(jì)、實(shí)惠、可靠，完善、穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)體系，優(yōu)秀的科研隊(duì)伍，*的實(shí)驗(yàn)設(shè)備、準(zhǔn)確可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我們還可以提供Elisa試劑盒、細(xì)胞株、抗體、血清、培養(yǎng)基、常用生化試劑、耗材。
peptide
*標(biāo)記的羊抗大鼠IgG Thymosin Alpha-1
PE-Cy3標(biāo)記的羊抗大鼠IgG Caspase-12
PE-CY5標(biāo)記的羊抗大鼠IgG Caspase-12(hunman)
APC標(biāo)記的羊抗大鼠IgG TmR2(GDNFR Beta；TRN-R；GFR-alpha-2；NTNR-2)
Alexa Fluor 350標(biāo)記的羊抗大鼠IgG TNF-Alpha(Tumor Necrosis Factor-Alpha)
Alexa Fluor 488標(biāo)記的羊抗大鼠IgG rh-TNF alpha protein GST Tagged
PE-Cy5.5標(biāo)記的羊抗大鼠IgG TRA16
Cy3標(biāo)記的羊抗大鼠IgG rh-IL-1Ra(Recombinant Human Interleukin-1 receptor antagonist His Tag)
Cy5標(biāo)記的羊抗大鼠IgG E.coli DH-5 Alpha(E.coli DH-5 Alpha Protein)
Cy5.5標(biāo)記的羊抗大鼠IgG Tranthyretin
Cy7標(biāo)記的羊抗大鼠IgG rh-EGF(Recombinant Epidermal growth factor)
Alexa Fluor 555標(biāo)記的羊抗大鼠IgG TrK A (h-NGFR) (p140- TrK A)
Alexa Fluor 647標(biāo)記的羊抗大鼠IgG TrK A.B.C
辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗豚鼠IgG active Caspase 3(caspase-3 p12 subunit)
*標(biāo)記的羊抗豚鼠IgG r-GST(Recombinant Glutathione S-T Ahents)
Cy5標(biāo)記的羊抗豚鼠IgG CASP4(Caspase-4)
Cy5.5標(biāo)記的羊抗豚鼠IgG Trk B
Cy7標(biāo)記的羊抗豚鼠IgG GDF8/MSTN(growth differntiation factor 8)
PE標(biāo)記的羊抗豚鼠IgG Trk B
PE-Cy3標(biāo)記的羊抗豚鼠IgG Trk C
PE-CY5標(biāo)記的羊抗豚鼠IgG TSHR (Thyroid stimulating hormone receptor)(NT)
APC標(biāo)記的羊抗豚鼠IgG Caspase-8 (pro Mch5)
Alexa Fluor 350標(biāo)記的羊抗豚鼠IgG TSHR (Thyroid stimulating hormone receptor)(CT)
Alexa Fluor 488標(biāo)記的羊抗豚鼠IgG TY3H ( Tyrosine Hydroxylase )
Alexa Fluor 555標(biāo)記的羊抗豚鼠IgG 

PFKP(Human phosphofructokinase-plaet) ELISA Kit  人血小板型磷酸果糖激酶   48T
UGCG(Human UDP-glucose ceramide glucosyltransferase) ELISA Kit  人尿苷二磷酸葡萄糖神經(jīng)酰胺葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶   48T
Casp4(Human caspase 4-apoptosis-related cysteine peptidase) ELISA Kit  人凋亡相關(guān)半*肽酶4   48T
PDXK(Human caspase 4-apoptosis-related cysteine peptidase) ELISA Kit  人吡哆醛/吡哆醇*6激酶   48T
DPYSL2(human dihydropyrimidinase-like 2) ELISA Kit  人二氫嘧啶酶樣2   48T
SGK2(Human serum/glucocorticoid regulated kinase 2) ELISA KIT  人血清/糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)激酶2   48T
MKK6(Human mitogen activated protein kinase kinase 6) ELISA Kit  人絲裂原活化蛋白激酶激酶6   48T
PDXP(Human pyridoxal/pyridoxine vitamin B6-phosphatase) ELISA Kit  人吡哆醛/吡哆醇*6磷酸酶   48T
Tgtp(Human T-cell specific GTPase) ELISA Kit  人T細(xì)胞特異性鳥苷三磷酸酶   48T
FDFT1(Human farnesyl-diphosphate farnesyltransferase 1) ELISA Kit  人法尼基二磷酸法尼基轉(zhuǎn)移酶1   48T
D-LDH(Human D-Lactate Dehydrogenase) ELISA Kit  人D-乳酸脫氫酶   48T
Alpha1-AT(Human Alpha1-Antitrypsin) ELISA Kit  人α1抗*   48T
KLK 1(Human Kallikrein 1) ELISA Kit  人*1   48T
KLK 6(Human Kallikrein 6) ELISA Kit  人*6   96T
PaCoA(Human Phosphorylated acetyl CoA) ELISA Kit  人磷酸化乙酰*   48T
PGAM2(Human phosphoglycerate mutase 2) ELISA Kit  人磷酸甘油酸變位酶2   48T