1.產(chǎn)品名稱：小鼠大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞實驗方法

2.組織來源：大隱靜脈組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×10^5cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

小鼠大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分離自大隱靜脈；大隱靜脈起于足背靜脈弓內(nèi)側(cè)端，經(jīng)內(nèi)踝前方，沿小腿內(nèi)側(cè)緣伴隱神經(jīng)上行，經(jīng)股骨內(nèi)側(cè)髁后方，進(jìn)入大腿內(nèi)側(cè)部，與股內(nèi)側(cè)皮神經(jīng)伴行，逐漸向前上，在恥骨結(jié)節(jié)外下方穿隱靜脈裂孔，匯入股靜脈，其匯入點稱為隱股點。有5條屬支：旋髂淺靜脈、腹壁淺靜脈、外靜脈、股內(nèi)側(cè)淺靜脈和股外側(cè)淺靜脈，它們匯入大隱靜脈的形式多樣，相互間吻合豐富。大隱靜脈曲張行高位結(jié)扎時，須分別結(jié)扎、切斷各屬支，以防復(fù)發(fā)。大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞對維持大隱靜脈動態(tài)平衡起著重要作用。它們合成、分泌凝血和纖溶系統(tǒng)的激活因子和抑制因子、影響血小板粘附和聚集的調(diào)節(jié)因子；大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞還釋放控制細(xì)胞增殖和調(diào)節(jié)血管壁緊張度的分子。

本公司的小鼠大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞采用*-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法、并通過內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10^5cells/瓶；細(xì)胞經(jīng)CD31/vWF免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

5.培養(yǎng)基信息：

M199、FBS、內(nèi)皮細(xì)胞生長添加劑、Heparin、Ascorbic Acid、Hydrocortisone、Penicillin、Streptomycin等

優(yōu)勢：
1、細(xì)胞株種類齊全，包括腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞、耐藥細(xì)胞株，如：人滑膜細(xì)胞，人胃癌細(xì)胞，人細(xì)胞，人腎近曲小管上皮細(xì)胞，肝癌細(xì)胞，心肌細(xì)胞，子宮內(nèi)膜細(xì)胞等
2、*，專業(yè)的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)指導(dǎo)
3、購買本公司的細(xì)胞株，免費(fèi)復(fù)蘇
4、客戶收到細(xì)胞后一天回傳細(xì)胞圖片，三天回傳細(xì)胞生長狀態(tài)圖片，五天內(nèi)有問題公司負(fù)責(zé)重發(fā)，超過五天時限至一個月內(nèi)重發(fā)細(xì)胞收半價，超過一個月重發(fā)全額收費(fèi)。
5、經(jīng)濟(jì)、實惠、可靠，完善、穩(wěn)定的實驗體系，優(yōu)秀的科研隊伍，*的實驗設(shè)備、準(zhǔn)確可靠的實驗結(jié)果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我們還可以提供Elisa試劑盒、細(xì)胞株、抗體、血清、培養(yǎng)基、常用生化試劑、耗材。
操作步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽*儲存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
大鼠促黃體激素 
大鼠抗心肌抗體 
人睪酮受體 
大鼠抗中性粒/中心體抗體 
人毒蕈堿型乙酰*受體 
大鼠磷脂酰肌醇抗體IgG/IgM 
人糖蛋白49A 
人抑制素β-B 
大鼠復(fù)合前列腺特異性抗原 
大鼠* 
人食欲素受體 
人生長激素釋放肽ghrelin 
大鼠β干擾素 
大鼠血小板因子3 
人鈣調(diào)素 
大鼠可溶性瘦素受體 
人真胰島素 
人重酒石酸* 
大鼠窖蛋白Caveolin1 
大鼠艾杜糖硫酸酯酶 
人前列環(huán)素 
人降鈣素原 
大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子 
大鼠腫瘤壞死因子α 
人反三碘甲狀腺原氨酸 
人6酮前列腺素F1a 
大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1 
人戊糖素 
大鼠干細(xì)胞因子/肥大細(xì)胞生長因子 
大鼠*腺嘌呤二核苷酸磷酸 
人變腎上腺素 
人多巴胺D1受體 
大鼠血小板衍生生長因子AB 
人腎上腺素能a1A受體 
大鼠血小板衍生生長因子可溶性受體α 
大鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子4 
人早老素2 
人異丙腎上腺素 
大鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子3 
人胰抑制素 
大鼠神經(jīng)生長因子 
大鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白3α 
人雄激素受體 
大鼠層連蛋白/板層素 
人松弛肽/松弛素 
大鼠白介素6 
人生長激素結(jié)合蛋白 
人腎上腺髓質(zhì)素 
大鼠白介素4 
 0.2ml
Anti-CD5/FITC  熒光素標(biāo)記CD5抗體IgG   0.2ml
Anti-CD5L/Api6/FITC  熒光素標(biāo)記CD5L抗體IgG   0.2ml
Anti-CD6/TP120/FITC  熒光素標(biāo)記CD6抗體IgG   0.2ml
Anti-CD7/FITC  熒光素標(biāo)記抗CD7抗體IgG   0.2ml
Anti-CD8/FITC  熒光素標(biāo)記CD8蛋白抗體IgG   0.2ml
Anti-CD9/MRP-1/FITC  熒光素標(biāo)記CD9抗體IgG   0.2ml
Anti-CD10/CALLA/FITC  熒光素標(biāo)記CD10抗體IgG   0.2ml
Anti-CD13/FITC  熒光素標(biāo)記氨肽酶N抗體IgG   0.2ml
Anti-CD14/FITC  熒光素標(biāo)記CD14蛋白抗體IgG   0.2ml
Anti-CD17/FITC  熒光素標(biāo)記CD17抗體IgG   0.2ml
Anti-CD18/LFA-1/FITC  熒光素標(biāo)記白細(xì)胞粘附蛋白抗體IgG   0.2ml
Anti-CD19/FITC  熒光素標(biāo)記CD19抗體IgG   0.2ml
Anti-Phospho-CD19 (Tyr531) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化CD19抗體IgG   0.2ml
Anti-CD19/PE  熒光素PE標(biāo)記CD19抗體IgG   0.2ml
Anti-CD20/FITC  熒光素標(biāo)記CD20抗體IgG   0.2ml
Anti-CD20/Biotin  *化CD20抗體IgG   0.2ml
Anti-CD20/MS4A1/PE  熒光素PE標(biāo)記CD20抗體IgG   0.2ml
Anti-CD25/IL-2RA /PE-Cy5  熒光素PE-Cy5標(biāo)記兔抗人、大、小鼠白介素2受體a鏈抗體IgG   0.2ml
Anti-CD22/FITC  熒光素標(biāo)記抗白細(xì)胞分化抗原CD22抗體IgG   0.2ml
Anti-CD23/Fc EpsilonR II /FITC  熒光素標(biāo)記CD23抗體IgG   0.2ml
Anti-CD24/FITC  熒光素標(biāo)記CD24蛋白抗體IgG   0.2ml
Anti-CD25/IL-2RA/FITC  熒光素標(biāo)記CD25/白介素2-受體抗體IgG   0.2ml