產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱：通用型基因組DNA提取試劑盒48次/盒 規(guī)格：48次/盒 分類：純化試劑盒 儲存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。 運(yùn)輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。 |
試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔） 2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。 3、 樣品稀釋液：1×20ml。 4、 檢測稀釋液A：1×10ml。 5、 檢測稀釋液B：1×10ml。 |
實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物） 3．10×PCR Buffer 4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5．Taq酶 | 二、操作步驟 1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1（10pM） 2μl 引物2（10PM） 2μl Taq酶（2U/μl） 1μl DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。 2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。 3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。 |
特點優(yōu)勢：
1. 特異性：所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1：序列資源豐富，除公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6. 優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。
四氧化三錳 SPAmberlyst® 15離子交換樹脂 干抗維生C氧化檢測試劑盒
硫代硫鎂 超純級2-溴-4-硝基咪唑 98%絲氨棕櫚酰轉(zhuǎn)移檢測試劑盒
硫化汞 紅色硫化汞 CP 十聯(lián) 99％β-半乳甘露聚糖檢測試劑盒
乙-2-萘酯 98%1-(2-乙基)-2-甲基-5-硝基-1H-咪唑 98%β-半乳糖甘露聚糖檢測試劑盒
4-肼 AR,≥98.0%二甲戊樂靈 分析標(biāo)準(zhǔn)品，99%NAD激檢測試劑盒
2-亞硝基-1-萘酚 98%二甲戊樂靈NAD激檢測試劑盒
正壬烷 standard for GC, ≥99.5% (GC)磺吡 分析標(biāo)準(zhǔn)品末端脫氧核轉(zhuǎn)移檢測試劑盒
正壬烷 99%磺吡甘薯病2檢測試劑盒
正壬烷 分析標(biāo)準(zhǔn)品, ≥99.8% (GC)磺二甲氧嘧啶鈉鹽 分析標(biāo)準(zhǔn)品甘薯病C檢測試劑盒
硝氮黃 Indicator磺二甲氧嘧啶鈉鹽 98%D-果糖檢測試劑盒
1-萘鹽鹽 AR磺吡 分析標(biāo)準(zhǔn)品抗菌肽檢測試劑盒
1-萘鹽鹽 99%磺吡凝集檢測試劑盒
核固紅 AR2,3-二甲 97%酚氧化檢測試劑盒
核固紅 Biological stain2,3-二甲 98%過氧化氫檢測試劑盒
偏磷 AR惡霉靈 分析標(biāo)準(zhǔn)品，99.8%超氧化物歧化檢測試劑盒
通用型基因組DNA提取試劑盒48次/盒 無水硫鎂 CP鄰二甲二甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml，溶劑：甲A1c(Mouse Glycated hemoglobin A1c) ELISA Kit 小鼠糖化血紅蛋白A1c
無水硫鎂 99.99% metals basis鄰二甲二甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液5000μg/ml，溶劑：甲LFA-3/CD58(Mouse lymphocyte function associated antigen 3) ELISA Kit 小鼠功能相關(guān)抗原3
硫鎳，七水 GR，99%鄰二甲二甲酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品sPECAM-1/sCD31(Mouse soluble plaet endothelial cell adhesion molecule 1) ELISA Kit 小鼠可溶性血小板內(nèi)皮粘附分子1
硫鎳，七水 99.99% metals basis鄰二甲二乙酯 standard for GC, ≥99.5% (GC)BMP-7(Mouse Bone morphogenetic protein 7) ELISA Kit 小鼠骨成型蛋白7
發(fā)煙硝 GR鄰二甲二乙酯 AR,99.5%HA(Mouse Hyaluronic acid) ELISA Kit 小鼠透明質(zhì)
發(fā)煙硝 AR鄰二甲二乙酯 CP,99.0%GLP-1HA(Mouse ghcagons-like pepfide 1) ELISA Kit 小鼠胰高血糖樣肽1
發(fā)煙硝 ACS reagent, ≥90.0%鄰二甲二乙酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品CCK(Mouse Cholecystokinin) ELISA Kit 小鼠膽囊收縮/腸促肽
氮川三乙 AR，98.5%三乙甘油酯 AR,98.5%BGP/Gehrelin(Mouse brain-gut peptides) ELISA Kit 小鼠腦腸肽
使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進(jìn)行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。
