產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱：乙型肝炎（HBV）核酸提取試劑盒 50次/盒 規(guī)格：50次/盒 分類：純化試劑盒 儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。 運(yùn)輸：低溫、避光，快遞免費(fèi)送貨上門。 |
試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔） 2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。 3、 樣品稀釋液：1×20ml。 4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。 5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。 |
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物） 3．10×PCR Buffer 4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5．Taq酶 | 二、操作步驟 1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1（10pM） 2μl 引物2（10PM） 2μl Taq酶（2U/μl） 1μl DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。 2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。 3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。 4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。 |
特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無需繁瑣的增菌過程。
4. 實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6. 優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。
2- 99%氧化鋱 99.9% metals basis番茄環(huán)斑病檢測(cè)試劑盒
4,6-二-2-甲基嘧啶 98%氧化鋱 99.99% metals basis煙草環(huán)斑病檢測(cè)試劑盒
2,4-二嘧啶 98%氧化鋱 99.999% metals basis花葉病檢測(cè)試劑盒
4,6-二羥基嘧啶 99%氧化銩 99.99% metals basis肌檢測(cè)試劑盒
4-羥基基乙乙酯 98%三氧化二鈦 200 mesh, 99.9%P選擇檢測(cè)試劑盒
吡脲（KT-30） 分析標(biāo)準(zhǔn)品二硫化鎢 99.9%莽草脫氫檢測(cè)試劑盒
2-羥基 99%二硫化鎢 99.99%，6µm酪氨解氨檢測(cè)試劑盒
4-羥基 99%錫 AR,99.5%磷甘油激檢測(cè)試劑盒
對(duì)羥基乙酰 98%錫 AR,100目鈣離子檢測(cè)試劑盒
對(duì)羥基甲酯 98%錫 SP葉綠合檢測(cè)試劑盒
3-甲氧基 99%錫 99.99% metals basis尿卟啉原Ⅲ合檢測(cè)試劑盒
2-甲氧基 99%高純錫 99.999% metals basis，1-6mm，顆粒乙酰脫氫檢測(cè)試劑盒
對(duì)羥基甲酯 99%錫 99.9999%脫氫檢測(cè)試劑盒
對(duì)羥基 98%錫 99.99999%伸展蛋白檢測(cè)試劑盒
鉬鈉 GR鈦粉 99.99% metals basis,300目脫氫檢測(cè)試劑盒
乙型肝炎（HBV）核酸提取試劑盒 50次/盒 芴甲氧羰基-O-叔丁基-D-蘇 98%三磷標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=3%（劇品）Anti-UCP-2/FITC 熒光標(biāo)記線粒體脫偶連蛋白2抗體IgG
FMOC-L-色五氟酯 98.0%三磷標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=6%（劇品）Anti-UCP-3/FITC 熒光標(biāo)記線粒體脫偶連蛋白3抗體IgG
Fmoc-D-Trp-OPfp 98%異惡草酮 分析標(biāo)準(zhǔn)品，98%Anti-UG/FITC 熒光標(biāo)記珠蛋白抗體IgG
N-Fmoc-O-芐基-L-磷酪 98%硫線磷 分析標(biāo)準(zhǔn)品，92%Anti-UMOD/FITC 熒光標(biāo)記UMOD抗體IgG
Fmoc-Tyr(tBu)-OPfp 98.5%磺隆 分析標(biāo)準(zhǔn)品，94%Anti-ULBP1/N2DL1/FITC 熒光標(biāo)記兔抗、大、小鼠UL16結(jié)合蛋白1蛋白抗體IgG
Fmoc-O-磷基-L-酪 98%環(huán)嘧磺隆 分析標(biāo)準(zhǔn)品，96%Anti-ULBP2/N2DL2/FITC 熒光標(biāo)記兔抗、大、小鼠UL16結(jié)合蛋白2抗體IgG
Fmoc-Tyr(PO<SUB>3</SUB>Bzl<SUB>2</SUB>)-OH 98.5%鼠 分析標(biāo)準(zhǔn)品，99%Anti-ULBP3/N2DL3/FITC 熒光標(biāo)記兔抗、大、小鼠UL16結(jié)合蛋白3抗體IgG
FMOC-L-纈五氟酯 98.0%氯鼠酮 分析標(biāo)準(zhǔn)品，98%Anti-UMOD/FITC 熒光標(biāo)記UMOD蛋白抗體IgG
使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 陽性對(duì)照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個(gè)樣品，則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取，多出的一個(gè)用作樣品制備陽性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），1 個(gè)用于PCR 陽性對(duì)照。
