產(chǎn)品名稱 | 生長特性 | 發(fā)貨地 | 貨期 |
犬腎細(xì)胞系/IgR;MDCK/IgR特性 | 貼壁生長 | 上海 | 3-5天 |
細(xì)胞名稱 犬腎細(xì)胞系/IgR;MDCK/IgR特性
形態(tài)特性 上皮細(xì)胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 該細(xì)胞為MDCK細(xì)胞的克隆系。
培養(yǎng)條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
傳代方法 1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C6
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶 同工酶鑒定
染色體
使用權(quán)限 A類
來源可靠(源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等),活力>95%,貼壁性好。我們從試劑、包被器皿、凍存原代細(xì)胞、新鮮原代細(xì)胞、原代細(xì)胞的分子學(xué)實(shí)驗(yàn)等提供全程服務(wù)。我司擁有專業(yè)的實(shí)驗(yàn)室,可無菌操作并提供相關(guān)科研項(xiàng)目解決方案以及實(shí)驗(yàn)服務(wù)。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2、培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細(xì)胞處理:
1、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量*,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
操作步驟:
1)貼壁細(xì)胞傳代:提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi),吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液,加少量PBS潤洗細(xì)胞,加入適量*,使*的量能蓋住細(xì)胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去*,加入新鮮培養(yǎng)基,晃動細(xì)胞瓶,終止*作用,用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液??刂拼荡虻牧Χ?,避免產(chǎn)生大量的氣泡,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶內(nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),隔天觀察貼壁生長情況。
2)懸浮細(xì)胞傳代:將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi),1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,用吸管小心吹散沉淀,制成細(xì)胞懸液,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶內(nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng)。
噻苯隆 ;賽苯隆 5-Phenylcarbamoylami,2,3-thiadiazole 51707-55-2
三氟甲磺酸銀 SILVER TRIFLUOROMETHANESULFONATE 2923-28-6
三氟磺酸 TrifluoroMethanesulfonic acid 1493-13-6
三氟磺酸酐 TrifluoroMethanesulfonic anhydride 358-23-6
三氟拉嗪T-8516(+4℃) NA
三汞 Mercuric trifluoroacetate 13257-51-7
*酯(TFAM) Methyl trifluoroacetate 431-47-0
三乙酯;三氟醋酸乙酯 Ethyl trifluoroacetate; 383-63-1
三癸酸甘油酯(-20℃) TRICAPRIN 621-71-6
*胺醇溶液 TRIMETHYLAMINE HYDROCHLORIDE 75-50-3
三硅烷 Iodotrimethylsilane 16029-98-4
甜菜堿;**胺內(nèi)鹽;*銨乙內(nèi)鹽 Betaine;Lycine;Glycocoll betaine;Glycine betaine;TriMethyl glycocoll anhydride;Oxyneurine;DiMethyl sarcosine;(CarboxyMethyl)triMethyl aMMoniuM hydrochloride inner salt;1-Carboxy-N,N,N-triMethylMethanaMiniuM inner salt;Betaine anhydrous 107-43-7
*基硅甲基鋰 (TRIMETHYLSILYL)METHYLLITHIUM 1822-00-0人H-ras 免疫試劑盒 Human H-ras ELISA Kit
人HLAⅡ類組織相容性抗原,DPα1鏈(HLA-DPA1)ELSIA 試劑盒 Human HLA-DPA1 ELSIA kit
人HIV-1 TAT互動蛋白2(HTATIP2/TIP30)免疫試劑盒 Human HTATIP2 ELISA Kit
人HIV(1+2)抗原抗體免疫試劑盒 Human HIV(1+2)antigen antibody ELISA Kit
人H5型病毒(H5N1)抗體(IgG)免疫試劑盒 Human H5N1 antibody IgG ELISA Kit
人G蛋白偶聯(lián)受體152(GPR152/PGR5)免疫試劑盒 Human GPR152 ELISA kit
人G蛋白偶聯(lián)受體109A(GPR109A)免疫試劑盒 human G protein-coupled receptor 109A,GPR109A ELISA Kit
人G蛋白偶聯(lián)膽汁酸受體1(GPBAR1)免疫試劑盒 Human GPBAR1 ELISA Kit
人G蛋白偶聯(lián)雌激素受體1(GPR30)免疫試劑盒 Human GPR30 ELISA Kit
人G蛋白偶合受體44(GPR44/CRTH2/DL1R)免疫試劑盒 Human GPR44 ELISA kit
人GTP酶NRas(NRAS)免疫試劑盒 Human NRAS ELISA kit
人Gremlin-1蛋白(GREM1)免疫試劑盒 Human GREM1 ELISA kit