即用型封堵液 (Nylon )50mL實驗方法磷酸化反應(前反應):
1. 在微量離心管中制備下列反應液:
2. 37℃反應 30 分鐘。
3. 下面的操作與交換反應的第 4-8 步操作相同。
合成 DNA 寡核苷酸的標記:
當摻入水平很低的時候,需要使用本步驟,即通過體積排阻色譜或過濾試 劑盒除去未反應的標記。Sephadex G-50 層析柱(需另購)對于去除未摻入 的 dNTPs 效果很好,它還能大幅減少小于 20 個堿基的 DNA 寡核苷酸和小于 20 bp 的雙鏈 DNA 的量。使用之前需要在 70℃加熱 5~10 分鐘以使 T4 多 聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 層析柱可以用來純化長度不小于 10 個 堿基的寡核苷酸。
即用型封堵液 (Nylon )50mL實驗方法使用方法:
一、交換反應 1. 實驗前需自備的試劑:7 M 醋酸銨、*乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應液: 成分 加入的體積 自備的 5’磷酸化 DNA 片段 14 μL(≤5 pmoles 的 5′末端) 5×交換反應緩沖液 5 μL [γ -32P] ATP 5 μL T4 多聚核苷酸激酶(10 U/μL) 1 μL 滅菌的超純水 補足到 25 μL 注:5 pmoles 的 5’末端約等于 0.17 μg 的長 100 bp 的雙鏈 DNA。
3. 37℃反應 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5~10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4(pH 4.5)。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀時使其終濃度達 300 mM。
6. 加入 87.5 μL(2.5 倍)的冷無水乙醇,-20℃放置 30~60 分鐘。
7. 離心回收沉淀,用 70%的冷乙醇清洗沉淀,真空干燥。 8. 用適當 Buffer 溶解沉淀。 注:通過第 5~8 步操作幾乎可以除去大部分未反應的[γ-32P] ATP,如要 *將其除去時,乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白質時,請在第
8 步之后進行。
即用型封堵液 (Nylon )50mL實驗方法產(chǎn)品介紹:
即用型封堵液 (Nylon )50mL實驗方法磷酸化反應標記:
A. 去磷酸化反應
1. 實驗前需自備的試劑:TE 飽和酚/、3 M NaCl 、*乙醇、70% 乙醇、牛小腸堿性磷酸酶(CIAP)等 2. 在微量離心管中制備下列反應液: 成分 加入的體積 自備的 DNA 片段 133 μL(≤10 μg) 1 M Tris-HCl,pH 8.0 15 μL 牛小腸堿性磷酸酶 (CIAP,10~20 U/μL)
2 μL 滅菌的超純水 補足到 150 μL
3. 50℃反應 30 分鐘。
4. 加入 150 μL 的 TE 飽和酚//(25:24:1),充分混勻。
5. 離心,取上層(水層)移到另一個微量離心管中。
6. 重復操作 4~5。
7. 加入 7.5 μL 的 3 M NaCl(zui終濃度 150 mM)。
8. 加入 375 μL(2.5 倍量)的冷無水乙醇,-20℃放置 30~60 分鐘。
9. 離心回收沉淀,用 1 mL 70%的冷乙醇清洗后,沉淀真空干燥。 10. 使用 20 μL 的 TE Buffer 溶解沉淀。
pH變色域:10.0(黃)~12.0(紅)
乙醇溶解試驗:合格
靈敏度試驗:合格
水溶解試驗:合格
〖灼燒殘渣〗(以〖硫酸鹽〗計):18.0~24.0%
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:棕黃色粉末。溶于水,其溶液呈棕黃色
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)酸堿指示劑,金屬著色劑。常用1%鈉鹽作指示劑
〖保存〗:RT
酸性茜素藍B
〖英文名稱〗:Acid alizarin blue B
〖其他名稱〗:媒染藍B;3-[(5-氯-2-羥基苯基)偶氮]-4,5-二羥基-2,7-萘二磺酸二鈉鹽;媒介藍13;鉻藍SE;酸性鉻深蘭;鉻蘭SE;酸性媒介溶藍;酸性鉻深藍;酸性媒介深藍
〖CAS號〗:1058-92-0
C16H9ClN2Na2O9S2=518.81
〖級別〗:BS
紅外光譜〖鑒別〗:合格
λmax:552~556nm(甲醇)
λmax:526.~530nm(甲醇)
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:藍黑色至棕黑色帶金屬光澤粉狀或深藍色粉末。溶于水呈品紅色,溶于溶纖素,稍溶于乙醇。在濃硫酸中呈溶藍色,稀釋后呈品紅色、在濃硝酸中呈棕光紅色溶注估燒堿液中呈紅光藍色溶液。其水溶液,加濃鹽酸呈品紅色、加濃氫氧呈藍色。染色時遇銅、〖鐵〗,色光變化大。水中溶解度(80℃)50g/L
基苯偶氮)-7-(3-乙酰基苯偶氮)-1,8-二羥基萘-3,6-二磺酸
即用型封堵液 (Nylon )50mL實驗方法錳鹽營養(yǎng)瓊脂250g用于嗜熱需氧芽孢桿菌的檢驗
牛津瓊脂(OXA)基礎 Oxford Agar Base 用于單增李氏菌的選擇性分離(SN標準)
GAM肉湯 Anaerobic Broth 250克 用于專性厭氧菌培養(yǎng)
發(fā)根農桿菌培養(yǎng)基250g/瓶incubationmedia發(fā)根農桿菌培養(yǎng)基250g/瓶
BrainHeartinfusionAgar
Mn2+NutrientAgar
緩沖李氏菌增菌肉湯基礎 Buffered Listeria Enrichment Broth 用于李氏菌的增菌培養(yǎng)(FDA標準)
乳糖-明膠培養(yǎng)基 Lactose-Gelatin Medium 250克 產(chǎn)氣莢膜梭菌明膠液化試驗
大腸桿菌顯色培養(yǎng)基l用于快速、準確檢測大腸桿菌大腸桿菌培養(yǎng)24小時,顯蘭色incubationmedia大腸桿菌顯色培養(yǎng)基l用于快速、準確檢測大腸桿菌大腸桿菌培養(yǎng)24小時,顯蘭色
Pfizer腸球菌選擇性瓊脂(PSE瓊脂) 250g 用于糞鏈球菌的選擇性分離和計數(shù)(SN標準)
卵黃瓊脂基礎250g加入卵黃,用于厭氧梭狀芽孢桿菌的分離培養(yǎng)
PALCAM瓊脂 PALCAM Agar 用于單增李氏菌選擇性分離(FDA標準)
TSC瓊脂 TSC Agar 250克 產(chǎn)氣莢膜梭菌的平板計數(shù)
大腸菌顯色培養(yǎng)基l用于快速、準確檢測大腸菌大腸菌培養(yǎng)24小時,顯蘭色incubationmedia大腸菌顯色培養(yǎng)基l用于快速、準確檢測大腸菌大腸菌培養(yǎng)24小時,顯蘭色
PfizerEnterococcusSelectiveAgar
EggYolkAgarBase
Hal